木糖苷酶的酶学性质分析及定向进化
| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| ·半纤维素 | 第13页 |
| ·木聚糖 | 第13-15页 |
| ·木聚糖酶 | 第15-19页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第15-17页 |
| ·木聚糖酶的催化机制 | 第17-19页 |
| ·木糖苷酶 | 第19-30页 |
| ·木糖苷酶的活性 | 第19页 |
| ·木糖苷酶的定位 | 第19页 |
| ·木糖苷酶的酶学性质 | 第19-23页 |
| ·木糖苷酶的基因工程 | 第23-24页 |
| ·木糖苷酶的作用模式和协同作用 | 第24-25页 |
| ·木糖苷酶酶家族 | 第25-30页 |
| ·木糖苷酶的应用 | 第30-32页 |
| ·糖苷水解酶的作用模式转换 | 第32-34页 |
| ·本研究的意义和目的 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-54页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·仪器设备 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·木糖苷酶基因gsxyn克隆 | 第36-40页 |
| ·扩增木糖苷酶基因 | 第36-37页 |
| ·扩增产物回收、酶连和转化 | 第37-38页 |
| ·扩增gsxyn基因 | 第38页 |
| ·木糖苷酶产物回收、酶切 | 第38-39页 |
| ·酶连和转化 | 第39-40页 |
| ·木糖苷酶GSxyn的表达与纯化 | 第40-41页 |
| ·质粒pGEX-6p-gsxyn转化 | 第40页 |
| ·木糖苷酶GSxyn的诱导表达 | 第40页 |
| ·木糖苷酶GSxyn的纯化 | 第40-41页 |
| ·凝胶电泳和蛋白浓度测定 | 第41页 |
| ·木糖苷酶GSxyn酶学性质研究 | 第41-44页 |
| ·绘制pNP的标准曲线 | 第41-42页 |
| ·木糖苷酶测定方法 | 第42页 |
| ·木糖苷酶最适pH和pH稳定性 | 第42页 |
| ·木糖苷酶最适温度和热稳定性 | 第42页 |
| ·木糖苷酶的动力学常数测定 | 第42-44页 |
| ·木糖苷酶GSxyn突变 | 第44-47页 |
| ·突变设计 | 第44页 |
| ·定点突变 | 第44-46页 |
| ·木糖苷酶突变基因的表达与纯化 | 第46页 |
| ·木糖苷酶突变蛋白的pH和温度研究 | 第46页 |
| ·突变蛋白酶动力学常数的测定 | 第46-47页 |
| ·木聚糖酶的酶学性质 | 第47-48页 |
| ·标准曲线绘制 | 第47页 |
| ·木聚糖酶测定方法 | 第47页 |
| ·木聚糖酶最适pH和pH稳定性 | 第47-48页 |
| ·木聚糖酶最适温度和热稳定性 | 第48页 |
| ·木聚糖酶的动力学常数测定 | 第48页 |
| ·木聚糖水解产物的分析 | 第48页 |
| ·木糖苷酶基因afc6xyn克隆 | 第48-51页 |
| ·扩增木糖苷酶基因 | 第48-51页 |
| ·回收、酶连和转化 | 第51页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn的表达与纯化 | 第51-53页 |
| ·质粒pGEX-6p-afc6xyn转化 | 第51页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn的纯化 | 第52页 |
| ·凝胶电泳和蛋白浓度测定 | 第52-53页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn酶学性质研究 | 第53-54页 |
| ·木糖苷酶最适pH和pH稳定性 | 第53页 |
| ·木糖苷酶最适温度和热稳定性 | 第53页 |
| ·木糖苷酶的动力学常数测定 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-73页 |
| ·木糖苷酶GSxyn的研究 | 第54-59页 |
| ·木糖苷酶序列分析 | 第54页 |
| ·木糖苷酶基因克隆 | 第54-56页 |
| ·木糖苷酶基因表达与纯化 | 第56-57页 |
| ·木糖苷酶酶学性质研究 | 第57-59页 |
| ·木糖苷酶GSxyn的定点突变 | 第59-67页 |
| ·木糖苷酶突变基因克隆 | 第60页 |
| ·木糖苷酶突变基因表达与纯化 | 第60-62页 |
| ·木糖苷酶Y509E突变体酶学性质研究 | 第62-66页 |
| ·木糖苷酶突变体的作用方式 | 第66-67页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn的研究 | 第67-73页 |
| ·木糖苷酶序列分析 | 第67页 |
| ·木糖苷酶基因克隆 | 第67-70页 |
| ·木糖苷酶基因表达与纯化 | 第70-71页 |
| ·木糖苷酶酶学性质研究 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-79页 |
| ·木糖苷酶GSxyn | 第73-75页 |
| ·木糖苷酶GSxyn突变 | 第75-76页 |
| ·木糖苷酶Afc6xyn | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-90页 |
| 附录 | 第90-103页 |
| 1. 溶液 | 第90-92页 |
| 2. 细菌基因组DNA抽提 | 第92-93页 |
| 3. 真菌基因组DNA抽提 | 第93页 |
| 4. 抽提细菌的质粒DNA | 第93-94页 |
| 5. 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第94页 |
| 6. 凝胶电泳分离蛋白 | 第94-95页 |
| 7. 木糖苷酶GSxyn核酸序列及氨基酸序列 | 第95-99页 |
| 8. 木糖苷酶Afc6xyn核酸序列及氨基酸序列 | 第99-102页 |
| 9. 研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
