| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 综述部分 | 第15-35页 |
| 一、动物性别控制的研究 | 第15-22页 |
| 二 RNA干扰的原理、机制及其在动物繁殖中的应用 | 第22-35页 |
| 1. RNAi的发展史 | 第23页 |
| 2. RNAi的作用机理 | 第23-26页 |
| ·参与RNAi机制的的主要分子 | 第24-25页 |
| ·dsRNA分子 | 第24页 |
| ·Dicer酶 | 第24-25页 |
| ·siRNA分子 | 第25页 |
| ·RISC | 第25页 |
| ·RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP) | 第25页 |
| ·RNAi作用机制 | 第25-26页 |
| 3. siRNAs的常见制备 | 第26-31页 |
| ·化学合成 | 第26页 |
| ·siRNA 表达载体 | 第26-27页 |
| ·用RNaseIII消化大片断dsRNA制备siRNA | 第27-28页 |
| ·体外转录 | 第28-29页 |
| ·siRNA表达框架 | 第29-31页 |
| 4. siRNA的介导途径 | 第31-32页 |
| 5. 检测RNAi结果的方法 | 第32页 |
| 6. RNAi技术在动物繁殖中的应用 | 第32-34页 |
| ·RNAi应用于动物卵母细胞 | 第32-33页 |
| ·RNAi应用与精子发生 | 第33页 |
| ·RNAi与动物的胚胎发育 | 第33-34页 |
| 7. 展望 | 第34-35页 |
| 试验研究 | 第35-68页 |
| 实验一 小鼠zfx基因shRNA表达载体的构建 | 第35-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| 2. 结果与分析 | 第41-44页 |
| ·目标序列的初步筛选 | 第41-42页 |
| ·表达载体的克隆与酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒表达载体的测序鉴定 | 第42-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-48页 |
| ·RNAi的作用原理 | 第44-45页 |
| ·siRNA的设计原则 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒的检测 | 第46-48页 |
| 实验二 zfx基因shRNA表达载体的细胞RNA干扰试验 | 第48-59页 |
| 1. 材料与方法 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·主要PCR引物 | 第50页 |
| ·主要实验动物 | 第50页 |
| 2. 主要实验方法 | 第50-54页 |
| ·重组表达质粒的大量制备与纯化 | 第50页 |
| ·生精细胞的分离与培养 | 第50-51页 |
| ·重组表达质粒转染生精细胞 | 第51-52页 |
| ·测定生精细胞zfx基因mRNA表达水平 | 第52-54页 |
| 3. 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·重组表达质粒转染生精细胞 | 第54页 |
| ·PCR结果分析 | 第54-55页 |
| ·zfxmRNA表达水平 | 第55-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-59页 |
| 实验三 zfx基因shRNA表达载体的体内RNA干扰试验 | 第59-68页 |
| 1. 材料与方法 | 第60-63页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·主要实验动物 | 第60页 |
| ·zfx基因shRNA重组表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·主要PCR引物 | 第61页 |
| ·重组表达质粒的大量制备与纯化 | 第61页 |
| ·小鼠体内zfx基因RNAi实验 | 第61-62页 |
| ·测定睾丸中zfx基因mRNA表达水平 | 第62-63页 |
| 2. 结果与分析 | 第63-66页 |
| ·PCR结果分析 | 第63-64页 |
| ·小鼠睾丸中zfxmRNA表达水平 | 第64-65页 |
| ·F1代小鼠的性别比例 | 第65-66页 |
| 3. 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 创新点 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 导师评阅表 | 第79页 |
