| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 缩表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| ·植物受精作用 | 第10-14页 |
| ·拟南芥双受精过程 | 第10-11页 |
| ·花粉发育 | 第11-13页 |
| ·花粉管生长 | 第13页 |
| ·Ca~(2+)与花粉管生长 | 第13-14页 |
| ·影响花粉发育的相关因素 | 第14-16页 |
| ·ATP 酶与花粉发育 | 第14-15页 |
| ·Ca~(~(2+))与花粉发育 | 第15-16页 |
| ·其他因素 | 第16页 |
| ·立题依据 | 第16-18页 |
| ·Atg58 背景 | 第16-17页 |
| ·立题依据 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·材料、菌株及载体 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18页 |
| ·实验常用溶液 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·实验所用引物 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-28页 |
| ·拟南芥的种植 | 第19-20页 |
| ·Trizol 法提取总RNA | 第20页 |
| ·反转录制备拟南芥cDNA | 第20页 |
| ·从cDNA 中扩增目的基因及产物回收 | 第20-22页 |
| ·PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第21-22页 |
| ·第二步PCR 扩增 | 第22页 |
| ·酶切回收目的片段 | 第22页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌（E.coli）感受态细胞的制备及转化 | 第22-23页 |
| ·E.coli TSS 感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·TSS 转化 | 第23页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1205-Atg58 的鉴定 | 第24页 |
| ·农杆菌( GV3101) 感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·GV3101 农杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·GV3101 农杆菌的转化 | 第25页 |
| ·农杆菌转染野生型拟南芥 | 第25页 |
| ·拟南芥转基因植物的筛选 | 第25页 |
| ·RNAi 转基因植株与野生型整花总ATP 酶的活性检测 | 第25-26页 |
| ·试剂的制备 | 第25-26页 |
| ·ATP 酶活性的测定 | 第26页 |
| ·RNAi 与WT 植株花粉的DAPI 染色对比 | 第26-27页 |
| ·RNAi 与WT 植株花粉及花粉管的Ca~(2+)荧光测定 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-36页 |
| ·GFP 载体的构建 | 第28-30页 |
| ·Atg58 基因片段的扩增 | 第28页 |
| ·目的基因扩增产物的测序 | 第28页 |
| ·重组质粒pFGC5941-Atg58 的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pEGAD5941-Atg58 对农杆菌的转化 | 第29页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第29页 |
| ·转化株的筛选及Atg58 的细胞内定位 | 第29-30页 |
| ·RNAi 突变体和WT 植株花粉发育过程中核分裂情况的比较 | 第30-32页 |
| ·RNAi 突变体和WT 植株花的总ATP 酶活性检测 | 第32页 |
| ·RNAi 突变体和WT 植株花粉内Ca~(2+)分布 | 第32-33页 |
| ·RNAi 突变体和WT 植株花粉管内Ca~(2+)分布 | 第33-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| ·Atg58 基因的亚细胞定位 | 第36页 |
| ·RNAi 突变体与ATP 酶 | 第36-37页 |
| ·RNAi 突变体与花粉核分裂 | 第37页 |
| ·RNAi 突变体与Ca~(2+)的分布 | 第37-40页 |
| 5 结论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
