| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·Patatin-like蛋白研究进展 | 第11-16页 |
| ·PLP的分类及其结构特点 | 第11-13页 |
| ·PLP的保守结构域 | 第13-15页 |
| ·PLP的生理功能及其作用机制 | 第15-16页 |
| ·蜡梅的研究与利用 | 第16页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第16-19页 |
| ·实时荧光定量PCR的工作原理 | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR中的常用方法 | 第18页 |
| ·实时荧光定量PCR的应用前景 | 第18-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| ·研究背景 | 第19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第3章 蜡梅CpPLP基因的克隆和分子特征分析 | 第21-35页 |
| ·实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·菌株与载体 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要设备 | 第21-22页 |
| ·自配主要试剂 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·EST序列特征分析以及蜡梅CpPLP的cDNA的获得 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·蜡梅总DNA的提取(试剂盒法) | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取(试剂盒法) | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·BioSpin Gel Extraction Kit试剂盒回收DNA片段 | 第25页 |
| ·载体pMD19-T与胶回收产物的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第26页 |
| ·转化子的鉴定 | 第26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| ·蜡梅CpPLP基因生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·蜡梅CpPLP克隆子的获得 | 第27页 |
| ·CpPLP基因cDNA序列特征 | 第27-28页 |
| ·CpPLP基因的Blast分析和蛋白同源性分析 | 第28-30页 |
| ·CpPLP编码蛋白的二级结构分析 | 第30-31页 |
| ·蜡梅Patatin-like蛋白的疏水性区域分析 | 第31-32页 |
| ·蜡梅Patatin-like蛋白的卷曲螺旋分析 | 第32-33页 |
| ·蜡梅Patatin-like蛋白的跨膜结构分析 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第4章 蜡梅CpPLP转录的实时荧光定量分析 | 第35-47页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·蜡梅组织的采集 | 第35-36页 |
| ·蜡梅不同时期花芽的采集 | 第36页 |
| ·蜡梅干旱胁迫处理及材料保存 | 第36页 |
| ·蜡梅总RNA提取 | 第36页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第36-37页 |
| ·CpPLP的表达特性分析 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·蜡梅总RNA提取 | 第39页 |
| ·CpPLP的表达特性分析 | 第39-42页 |
| ·CpPLP表达的实时荧光定量分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 第5章 植物表达载体的构建及转化烟草研究 | 第47-73页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·菌株与载体 | 第47页 |
| ·主要生化试剂与设备 | 第47页 |
| ·常用试剂配方 | 第47-48页 |
| ·常用培养基 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-59页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA2301g/CpPLP | 第49-52页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草的移栽 | 第53页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第53-55页 |
| ·转基因烟草蛋白质含量的测定 | 第55页 |
| ·转基因烟草中PLP的LAH活性检测 | 第55页 |
| ·转基因烟草的抗病性鉴定试验 | 第55-57页 |
| ·转基因烟草的干旱胁迫试验 | 第57-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-70页 |
| ·蜡梅CpPLP植物表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·蜡梅CpPLP基因转化烟草以及转化植株的获得 | 第61-64页 |
| ·转基因烟草蛋白质含量的测定 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草的酯酰水解酶(LAH)活性检测 | 第65页 |
| ·转基因烟草的抗病性试验 | 第65-68页 |
| ·转基因烟草的干旱胁迫试验 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第6章 总结 | 第73-75页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·后续研究计划 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 缩略词表 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 在校期间发表论文和参与项目 | 第85页 |
