| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-18页 |
| ·热休克蛋白的概述 | 第13-14页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第13页 |
| ·热休克蛋白在细胞中的分布及其分子结构特征 | 第13-14页 |
| ·热休克蛋白的特性 | 第14页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 | 第14-16页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 家族的特性 | 第15页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 和 Hsc70 的联系与区别 | 第15-16页 |
| ·昆虫学中的 Hsp70 研究 | 第16页 |
| ·Hsp70 与昆虫滞育 | 第16页 |
| ·Hsp70 在昆虫生物学方面的研究 | 第16页 |
| ·研究目的及意义 | 第16-17页 |
| ·试验技术路线 | 第17页 |
| ·本试验课题的来源 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-33页 |
| ·试验材料 | 第18-19页 |
| ·昆虫来源 | 第18页 |
| ·试验仪器 | 第18页 |
| ·分子生物学用的酶和试剂盒以及各种试剂和培养基 | 第18-19页 |
| ·生物信息学软件及其相关网站 | 第19页 |
| ·试验方法 | 第19-26页 |
| ·大豆蚜 RNA 提取 | 第19-20页 |
| ·利用 RT-PCR 扩增保守区之间的 cDNA 序列 | 第20-21页 |
| ·RACE 引物设计 | 第21-22页 |
| ·3′-RACE 的试验步骤 | 第22-23页 |
| ·5′-RACE 试验步骤 | 第23-26页 |
| ·全长 cDNA 的获取 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26-27页 |
| ·利用 BLAST 软件进行序列相似性检索 | 第26-27页 |
| ·分子质量、碱基组成、碱基分布 | 第27页 |
| ·全长 cDNA 可读框架分析 | 第27页 |
| ·对 ORF 进行限制性酶切分析 | 第27页 |
| ·核酸序列分析的功能预测 | 第27页 |
| ·蛋白质基本性质分析 | 第27页 |
| ·蛋白质功能预测 | 第27-28页 |
| ·蛋白质序列同源性分析及蛋白质功能预测 | 第27页 |
| ·蛋白质的功能的预测 | 第27-28页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 基因在原核载体中的表达 | 第28-30页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 基因 cDNA 序列 ORF 的 PCR 反应 | 第28页 |
| ·PCR 产物与 pET21b 质粒酶切反应 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·热休克蛋白 Hsp70 基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第30页 |
| ·表达蛋白的 WESTERN BLOT 分析 | 第30-31页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第30页 |
| ·Western blot 分析 | 第30-31页 |
| ·大豆蚜 HSP70 和 HSC70 表达水平研究 | 第31-33页 |
| ·大豆蚜基因的提取 | 第31页 |
| ·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第31页 |
| ·荧光定量 PCR 的反应体系和步骤 | 第31-32页 |
| ·荧光定量 PCR 反应的结果分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-64页 |
| ·RT-PCR 得到的基因保守区片段 | 第33-34页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因的保守区序列片段 | 第33页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因的保守区序列片段 | 第33-34页 |
| ·Hsp70 基因 cDNA 序列的 3′ RACE | 第34-35页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因 cDNA 序列的 3′-RACE | 第34-35页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因 cDNA 序列的 3′-RACE | 第35页 |
| ·Hsp70 基因 cDNA 序列的 5′RACE | 第35-36页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因 cDNA 序列的 5′-RACE | 第35-36页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因 cDNA 序列的 5′-RACE | 第36页 |
| ·全长基因的获得 | 第36-37页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因 cDNA 的全长序列 | 第36-37页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因 cDNA 的全长序列 | 第37页 |
| ·基因全长 CDNA 序列推导的氨基酸序列分析 | 第37-41页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因全长 cDNA 序列推导的氨基酸序列分析 | 第37-39页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因全长 cDNA 序列推导的氨基酸序列分析 | 第39-41页 |
| ·HSP70 的基因特征分析 | 第41-47页 |
| ·氨基酸序列组成分析 | 第41-42页 |
| ·信号肽分析 | 第42-44页 |
| ·氨基酸 N 位糖基化位点预测 | 第44-45页 |
| ·氨基酸疏水性分析 | 第45-46页 |
| ·蛋白三维结构模型的建立 | 第46-47页 |
| ·克隆得到基因氨基酸的序列同源性比较与聚类分析 | 第47-56页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因氨基酸序列同源性比较 | 第47-51页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因氨基酸序列同源性比较 | 第51-56页 |
| ·已获得基因的氨基酸序列聚类分析 | 第56-58页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 基因氨基酸序列一致性比较 | 第56-57页 |
| ·大豆蚜 Hsc70 基因氨基酸序列一致性比较 | 第57-58页 |
| ·大豆蚜热休克蛋白 70 基因在大肠杆菌中的表达及 WESTERN BLOT 分析 | 第58-62页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体 pET21b/HSP70 的构建与鉴定 | 第58-60页 |
| ·大豆蚜 Hsp70 蛋白表达及 Western blot 分析 | 第60-62页 |
| ·大豆蚜 HSP70 和 HSC70 表达水平研究 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·研究方法的探讨 | 第64页 |
| ·基因克隆与蛋白表达过程中需注意的问题 | 第64页 |
| ·关于荧光定量分析的讨论 | 第64页 |
| ·实验结果的探讨 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
