| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 第一章 Spred蛋白家族研究进展 | 第12-27页 |
| 1. Spred蛋白家族结构域及功能 | 第13-15页 |
| ·EVH1区域 | 第13-14页 |
| ·KBD区域 | 第14页 |
| ·SPR区域 | 第14-15页 |
| 2. Spred蛋白家族的表达模式及细胞定位 | 第15-17页 |
| ·Spred蛋白家族的表达模式 | 第15-16页 |
| ·Spred蛋白家族的细胞定位 | 第16-17页 |
| 3. Spred蛋白家族的结合蛋白 | 第17页 |
| 4. Spred蛋白家族信号转导及生物学功能 | 第17-21页 |
| ·Spred蛋白家族的调节功能 | 第17-19页 |
| ·Spred蛋白家族对Ras/ERK激酶的抑制功能 | 第19-21页 |
| 5. PI3K及p85简介 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 Spred-2与p85相互作用对Erk1/2活化的影响 | 第27-54页 |
| 前言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·细菌、质粒和细胞 | 第28页 |
| ·主要试剂及配方 | 第28-29页 |
| ·溶液配制 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-31页 |
| ·抗体 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·DNA片段亚克隆及定点诱变 | 第31-34页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303F的构建 | 第31-33页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303F上游片段的PCR扩增及纯化回收 | 第31-32页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303F下游片段的PCR扩增及纯化回收 | 第32页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303F全长片段的扩增及纯化回收 | 第32页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303F的克隆及鉴定 | 第32-33页 |
| ·pRK5-Spred2-Y343F的构建 | 第33页 |
| ·pRK5-Spred2-Y353F的构建 | 第33页 |
| ·pRK5-Spred2-Y343/353F的构建 | 第33页 |
| ·pRK5-Spred2-Y303/343/353F的构建 | 第33页 |
| ·Spred2及各突变体重组腺病毒质粒构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·细胞培养及计数 | 第34页 |
| ·Western blot检测相关蛋白 | 第34-37页 |
| ·Western blot样品制备 | 第34页 |
| ·免疫共沉淀样品制备 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| ·上样 | 第35页 |
| ·电泳 | 第35页 |
| ·电转移 | 第35-36页 |
| ·抗原抗体反应 | 第36-37页 |
| ·封闭 | 第36页 |
| ·一抗作用 | 第36页 |
| ·二抗作用 | 第36-37页 |
| ·显影 | 第37页 |
| ·转染 | 第37页 |
| ·细胞增殖分析 | 第37页 |
| ·细胞分化分析 | 第37页 |
| 2 实验结果 | 第37-51页 |
| ·PI3K的调节亚基p85与Spred2蛋白的结合 | 第38-40页 |
| ·Spred2蛋白SPR区第303、343、353位氨基酸对p85与Spred2的结合及Spred2蛋白对Ras/ERK活化的抑制作用是必需的 | 第40-44页 |
| ·p85与Spred2结合后通过增强Ras与Spred2的结合和降低Spred2泛素化来增强Spred2的抑制作用 | 第44-48页 |
| ·Spred2蛋白p85结合位点的突变体促进细胞增殖及PC12细胞分化 | 第48-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第55-56页 |
