| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 1. 唾液腺概述 | 第15-16页 |
| 2. 唾液成分及功能 | 第16-17页 |
| ·唾液的成分 | 第16页 |
| ·唾液的功能 | 第16-17页 |
| 3. 人类唾液腺β-淀粉酶基因的进展研究 | 第17-21页 |
| ·α-淀粉酶的研究历史 | 第17页 |
| ·人类唾液腺淀粉酶基因的结构 | 第17-19页 |
| ·γ-actin假基因与AMY基因的重叠现象 | 第19页 |
| ·人类内源性逆转录病毒DNA中断人类γ-actin假基因 | 第19-21页 |
| ·人类唾液淀粉酶基因AMY1组织特异性表达调控 | 第21页 |
| 4. 腮腺分泌蛋白的相关研究 | 第21-24页 |
| ·腮腺分泌蛋白 | 第21-22页 |
| ·腮腺分泌蛋白表达基因的结构及调控 | 第22-23页 |
| ·唾液腺生物反应器的应用前景 | 第23-24页 |
| 第二章 实验研究 | 第24-67页 |
| 实验一 人α-唾液腺淀粉酶基因和广西巴马小型猪腮腺分泌蛋白基因5'调控序列的克隆 | 第24-41页 |
| 1、实验材料 | 第24-26页 |
| ·组织样品 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·酶类及主要药品试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2、实验方法 | 第26-32页 |
| ·DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-30页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第30-31页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第31页 |
| ·重组质粒转化细菌 | 第31页 |
| ·阳性菌株的筛选 | 第31-32页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第32页 |
| ·质粒的抽提 | 第32页 |
| 3、结果与分析 | 第32-38页 |
| ·人类和广西巴马小型猪的血液DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·AMY769、AMY 999和PSP的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·PMD18-T-AMY769重组质粒、PMD18-T-AMY999重组质粒和PMD18-T-PSP重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第34-36页 |
| ·AMY 769、AMY999和PSP测序结果 | 第36-38页 |
| 4、讨论及小结 | 第38-41页 |
| ·人α-唾液腺淀粉酶基因启动子的选择 | 第38-39页 |
| ·腮腺分泌蛋白基因启动子的选择 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 实验二 人α-唾液腺淀粉酶基因和广西巴马小型猪腮腺分泌蛋白基因5'调控序列的功能验证 | 第41-60页 |
| 1、实验材料 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要药品试剂 | 第41-42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42页 |
| 2、实验方法 | 第42-49页 |
| ·细胞复苏 | 第42页 |
| ·细胞冻存 | 第42-43页 |
| ·细胞的传代培养 | 第43页 |
| ·带有双酶切位点的人α-唾液腺淀粉酶基因和广西巴马小型猪腮腺分泌蛋白基因5’调控序列的克隆 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第44页 |
| ·酶切产物的唰收纯化 | 第44页 |
| ·目的片段与PEGFP-N1载体的连接反应 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的转化、细菌转化子的筛选 | 第45页 |
| ·质粒的提取 | 第45-46页 |
| ·转染用质粒线性化 | 第46-47页 |
| ·线性化后质粒纯化 | 第47页 |
| ·细胞转染 | 第47-48页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测 | 第49页 |
| 3、结果 | 第49-58页 |
| ·小鼠肥腺细胞传代培养 | 第49-50页 |
| ·重组质粒AMY763-PEGFP-N1和PSP-pEGFP-N1的菌液PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·带酶切何点的重组质粒双酶切 | 第51-52页 |
| ·AMY763-PEGFP-N1重组质粒和PSP-pEGFP-N1重组质粒的测序结果 | 第52-54页 |
| ·质粒提取结果 | 第54-55页 |
| ·线性化质粒纯化结果 | 第55页 |
| ·细胞转染结果 | 第55-57页 |
| ·细胞RNA提取 | 第57页 |
| ·RT-PCR电泳检测 | 第57-58页 |
| 4、讨论及小结 | 第58-60页 |
| ·表达载体的选择及重组载体的构建 | 第58-59页 |
| ·转染结果分析 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 实验三 睾丸注射法生产转基因小鼠 | 第60-67页 |
| 1、实验材料 | 第60-61页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·主要药品 | 第60页 |
| ·主要试剂的配置 | 第60-61页 |
| 2、实验方法 | 第61-62页 |
| ·脂质体体外睾丸注射法注射雄鼠 | 第61页 |
| ·F1代小鼠的检测 | 第61-62页 |
| 3、结果 | 第62-64页 |
| ·AMY763-PEGFP-N1和PSP-pEGFP-N1转基因小鼠F1代外形观察 | 第62-63页 |
| ·F1代小鼠PCR检测 | 第63-64页 |
| 4、讨论及小结 | 第64-67页 |
| ·精子载体法生产转基因动物 | 第64-65页 |
| ·外源基因对转基因动物产生的影响 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
