| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 缩略语表 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-22页 |
| ·T-2毒素毒性概况 | 第18页 |
| ·T-2毒素对造血系统毒性研究概况 | 第18-20页 |
| ·T-2毒素与氧化应激的关系 | 第20页 |
| ·本课题研究技术 | 第20-22页 |
| ·研究目标和内容 | 第22页 |
| 2 材料方法 | 第22-46页 |
| ·细胞株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·细胞培养及冻存 | 第27-28页 |
| ·细胞活力测定 | 第28-29页 |
| ·MTT试验 | 第28页 |
| ·乳酸脱氢酶(LDH)释放测定 | 第28-29页 |
| ·细胞红系分化检测 | 第29-30页 |
| ·T-2毒素影响K562细胞红系分化时间和剂量确定 | 第29页 |
| ·AG490和芦荟苷对K562细胞红系分化的影响 | 第29-30页 |
| ·细胞内活性氧ROS检测 | 第30页 |
| ·K562细胞基因表达谱检测 | 第30-34页 |
| ·总RNA的提取和纯化 | 第31页 |
| ·cDNA的合成和纯化 | 第31-32页 |
| ·IVT合成cRNA和cRNA的纯化 | 第32-33页 |
| ·cRNA片段化 | 第33-34页 |
| ·芯片杂交 | 第34页 |
| ·芯片洗脱 | 第34页 |
| ·芯片扫描 | 第34页 |
| ·实时荧光定量PCR验证基因芯片中差异基因的mRNA表达 | 第34-36页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第35页 |
| ·cDNA合成 | 第35页 |
| ·相关实时荧光定量Real-time PCR | 第35-36页 |
| ·荧光定量数据分析 | 第36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| ·Western Blot方法验证p-STAT5B蛋白表达情况 | 第36-39页 |
| ·细胞处理及分组 | 第36-37页 |
| ·细胞蛋白提取及浓度测定 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·转膜 | 第38页 |
| ·封闭 | 第38页 |
| ·一抗孵育 | 第38页 |
| ·二抗孵育 | 第38页 |
| ·化学发光显色 | 第38-39页 |
| ·细胞周期检测 | 第39页 |
| ·双向电泳技术检测K562细胞差异蛋白质组学研究 | 第39-44页 |
| ·细胞处理及分组 | 第40页 |
| ·细胞总蛋白的制备 | 第40页 |
| ·蛋白质定量 | 第40-41页 |
| ·蛋白质水化上样 | 第41页 |
| ·一相等点聚焦(IEF) | 第41页 |
| ·IPG胶条平衡 | 第41-42页 |
| ·相SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| ·染色 | 第43页 |
| ·图像扫描及分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白质质谱鉴定 | 第44-46页 |
| ·胶内酶解 | 第44-45页 |
| ·MALDI-TOF质谱分析及数据库搜索 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-89页 |
| ·T-2毒素所致K562细胞剂量及时间依赖性毒性作用 | 第46页 |
| ·T-2毒素对K562细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响 | 第46-47页 |
| ·T-2毒素对K562细胞红系分化的影响 | 第47-50页 |
| ·T-2毒素对K562细胞内氧自由基(ROS)释放的时效规律 | 第50-51页 |
| ·K562细胞基因表达谱检测 | 第51-69页 |
| ·总RNA质量的鉴定 | 第51页 |
| ·差异基因数量分析 | 第51-53页 |
| ·差异基因数量分析 | 第53-69页 |
| ·Real-time PCR验证基因芯片中部分差异基因的mRNA表达 | 第69-74页 |
| ·RNA提取质量的鉴定 | 第69页 |
| ·相关基因定量溶解曲线和标准曲线 | 第69-70页 |
| ·通路关键基因mRNA表达水平的验证 | 第70-73页 |
| ·红系分化相关基因mRNA表达水平的验证 | 第73-74页 |
| ·荧光定量PCR验证基因与芯片结果对比情况 | 第74页 |
| ·T-2毒素对p-STAT5B蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| ·Western blot验证T-2毒素对MS4A3蛋白表达的影响 | 第75-76页 |
| ·JAK-STAT通路特异性抑制剂对K562细胞红系分化的影响 | 第76-77页 |
| ·T-2毒素对K562细胞周期的影响 | 第77-78页 |
| ·双向电泳寻找T-2毒素作用K562细胞后差异表达蛋白结果 | 第78-89页 |
| 4 讨论 | 第89-103页 |
| ·T-2毒素影响K562细胞红系分化的毒性作用 | 第89-90页 |
| ·T-2毒素对K562细胞氧自由基释放的机制 | 第90-91页 |
| ·基因芯片剂量、时间选取依据 | 第91-92页 |
| ·T-2毒素对K562细胞毒性靶基因功能分析 | 第92-96页 |
| ·造血细胞分化相关基因 | 第92-93页 |
| ·细胞周期调控相关基因 | 第93-94页 |
| ·合成代谢相关基因 | 第94-95页 |
| ·细胞信号转导相关基因 | 第95-96页 |
| ·基因芯片结果验证基因选取理由及结果 | 第96-97页 |
| ·T-2毒素对K562细胞毒性靶蛋白功能分析 | 第97-99页 |
| ·基因芯片及双向电泳结果之间的关系 | 第99-100页 |
| ·T-2毒素影响K562细胞向红系细胞分化的分子机理 | 第100-103页 |
| 5 全文总结 | 第103-105页 |
| 6 文献综述：单端孢毒素毒性作用及信号转导通路 | 第105-122页 |
| ·单端孢霉烯族毒素的危害 | 第105-107页 |
| ·T-2毒素的危害 | 第105-106页 |
| ·雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol,NIV)的危害 | 第106页 |
| ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的危害 | 第106-107页 |
| ·毒理学 | 第107-119页 |
| ·T-2毒素 | 第107-111页 |
| ·雪腐镰刀菌烯醇(NIV) | 第111-115页 |
| ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON) | 第115-119页 |
| ·单端孢霉烯族毒素毒性的分子机制 | 第119-120页 |
| ·T-2毒素毒性的分子机制及信号通路 | 第119页 |
| ·DON毒性的分子机制及信号通路 | 第119-120页 |
| ·结论与展望 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 作者简介 | 第138-139页 |
| 附录 | 第139-165页 |
