中文摘要 | 第1-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
1 前言 | 第12-24页 |
·植物油脂合成的途径 | 第13-15页 |
·植物脂肪酸的合成途径 | 第13-14页 |
·油脂的合成 | 第14-15页 |
·植物Δ9-硬脂酰 ACP 脱氢酶基因(SAD)的研究进展 | 第15-17页 |
·植物 SAD 基因的序列特征 | 第15-16页 |
·植物 SAD 蛋白的结构与特征 | 第16页 |
·植物 SAD 遗传转化的研究进展 | 第16-17页 |
·植物Δ12-脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)的研究进展 | 第17-19页 |
·植物 FAD2 基因的序列特征 | 第17页 |
·FAD2 促成高油酸性状的遗传基础 | 第17-18页 |
·花生 FAD2 基因的研究进展 | 第18-19页 |
·植物二酰甘油酰基转移酶基因(DGAT)的研究进展 | 第19-21页 |
·植物 DGAT 蛋白分类 | 第19-20页 |
·植物 DGAT 基因的研究进展 | 第20-21页 |
·花生栽培种起源及花生区组种间亲缘关系研究 | 第21-23页 |
·花生属植物的分类 | 第21-22页 |
·花生栽培种与二倍体野生种间亲缘关系的研究 | 第22-23页 |
·本研究的目的意义 | 第23-24页 |
2 材料与方法 | 第24-38页 |
·花生 DGAT3 和 SAD 基因的克隆试验 | 第24-32页 |
·试验材料 | 第24-25页 |
·植物材料 | 第24-25页 |
·主要试剂 | 第25页 |
·试验方法 | 第25-32页 |
·花生 DGAT3 和 SAD 的引物设计 | 第25页 |
·花生幼果总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
·总 RNA 的检测 | 第26页 |
·所提取 RNA 的逆转录 | 第26页 |
·目的基因 DGAT3 和 SAD 的 RT-PCR | 第26-27页 |
·花生基因组 DNA 的提取 | 第27-28页 |
·以 DNA 为模板 PCR 扩增 DGAT3 和 SAD | 第28-29页 |
·目的基因的胶回收 | 第29-30页 |
·目的片段与 pEASY-T1 载体连接并转化大肠杆菌 | 第30页 |
·阳性重组子鉴定和测序 | 第30-31页 |
·序列分析 | 第31页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第31-32页 |
·花生 SAD 表达载体的构建 | 第32-34页 |
·试验材料 | 第32页 |
·菌种和质粒 | 第32页 |
·酶和试剂 | 第32页 |
·试验方法 | 第32-34页 |
·表达载体构建的技术路线 | 第32-33页 |
·表达载体构建具体步骤 | 第33-34页 |
·花生 FAD2 的转化试验 | 第34-38页 |
·试验材料 | 第34-35页 |
·试验方法 | 第35-38页 |
·基因转化方法 | 第35-36页 |
·转基因花生的鉴定 | 第36页 |
·T_0代转基因苗移栽 | 第36-37页 |
·T_1代转基因植株的种植 | 第37页 |
·T_1代转基因植株的 PCR 检测 | 第37-38页 |
3 结果与分析 | 第38-58页 |
·花生 DGAT3 的克隆及序列分析 | 第38-45页 |
·花生总 RNA 的提取及逆转录 | 第38页 |
·花生 DGAT3 扩增及测序结果 | 第38-40页 |
·花生 DGAT3 核苷酸序列分析 | 第40-42页 |
·不同栽培品种 DGAT3 核苷酸序列分析 | 第42-43页 |
·不同野生种 DGAT3 核苷酸序列分析 | 第43页 |
·栽培种和野生种 DGAT3 序列的分子进化分析 | 第43-44页 |
·花生 DGAT3 核苷酸序列推导的氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
·花生 SAD 的克隆及序列分析 | 第45-54页 |
·花生 SAD 的克隆 | 第45-46页 |
·丰花 2 号 SAD 核苷酸序列分析 | 第46-50页 |
·花生 SAD 核苷酸序列推导的氨基酸序列分析 | 第50-51页 |
·3 个栽培品种和 2 个野生种间 SAD 核苷酸序列分析 | 第51-52页 |
·花生与其它油料作物 SAD 编码的氨基酸序列分析 | 第52-54页 |
·花生 SAD 表达载体的构建 | 第54-55页 |
·花生 FAD2 基因的遗传转化 | 第55-58页 |
·Kan 抗性转基因植株的获得 | 第55-56页 |
·T_0代转基因苗大田移栽及 PCR 检测 | 第56页 |
·T_1代转基因植株种植及 PCR 检测 | 第56-58页 |
4 讨论 | 第58-62页 |
·花生栽培种与二倍体野生种之间亲缘关系的探讨 | 第58页 |
·花生区组二倍体野生种 A. batizocoi 的分析 | 第58-59页 |
·花生两条 DGAT3 序列的差异分析 | 第59页 |
·花生 DGAT3 的多态性与含量油的相关性分析 | 第59-60页 |
·花生两条 SAD 序列的差异分析 | 第60页 |
·表达载体构建的注意事项 | 第60-62页 |
5 结论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-71页 |
附录1:主要化学试剂及缓冲液配制 | 第71-72页 |
附录2:常用培养基配方 | 第72-74页 |
图版 | 第74-75页 |
致谢 | 第75-76页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第76页 |