| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| ·TGF‐β信号通路的研究背景 | 第14页 |
| ·TGF‐β信号的传导 | 第14-16页 |
| ·TGF‐β信号通路的Smad 蛋白家族 | 第16-17页 |
| ·抑制型Smad 蛋白研究进展 | 第17页 |
| ·Smad7‐NTD 的作用以及研究现状 | 第17-19页 |
| ·生物信息学的意义及其应用 | 第19-20页 |
| ·结构生物学及其研究目的 | 第20页 |
| ·本实验的研究内容和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24-26页 |
| ·主要的酶及试剂 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-29页 |
| ·培养基和使用化学试剂的配制 | 第26-28页 |
| ·亲和层析、凝胶过滤的缓冲液 | 第28-29页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第29页 |
| ·主要实验方法 | 第29-40页 |
| ·引物设计、合成、准备 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增目标片段 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·凝胶回收 | 第31-32页 |
| ·限制性内切酶切割 | 第32-33页 |
| ·酶切产物的琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第33页 |
| ·片段与载体的连接 | 第33页 |
| ·转化感受态细胞 | 第33-34页 |
| ·小规模质粒提取 | 第34-35页 |
| ·蛋白质表达测试及纯化 | 第35-36页 |
| ·蛋白质大规模表达纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白质离子交换层析纯化 | 第37页 |
| ·蛋白质浓缩 | 第37-38页 |
| ·凝胶过滤纯化蛋白 | 第38-39页 |
| ·Smad7‐NTD 蛋白降解实验 | 第39-40页 |
| 第3章 HumanSmad7‐NTD 生物信息学分析 | 第40-46页 |
| ·前言 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-45页 |
| ·FoldIndex 蛋白折叠倾向性预测 | 第41-42页 |
| ·NPP 蛋白折叠倾向性预测 | 第42-43页 |
| ·PredictProtein 蛋白二级结构预测 | 第43-44页 |
| ·I‐Smads 蛋白序列对比 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 Smad7 的 N 端约20 个氨基酸残基对其蛋白可溶性有重要影响 | 第46-52页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第5章 Smad7‐NTD 中预测 Loop 结构对蛋白质性质的影响 | 第52-65页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-63页 |
| ·删除Loop 区域重组蛋白的构建和亲和层析纯化 | 第53-58页 |
| ·降解实验 | 第58-61页 |
| ·凝胶过滤色谱检查蛋白质状态 | 第61-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第6章 Smad6‐NTD 生物信息学分析 | 第65-69页 |
| ·前言 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-68页 |
| ·FoldIndex 蛋白折叠倾向性预测 | 第65-66页 |
| ·NPP 蛋白折叠倾向性预测 | 第66-67页 |
| ·PredictProtein 蛋白二级结构预测 | 第67-68页 |
| ·I‐Smads 蛋白序列对比 | 第68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 第7章 Smad2‐MH1 结构生物学研究 | 第69-77页 |
| ·前言 | 第69-70页 |
| ·实验结果 | 第70-76页 |
| ·Smad 蛋白序列比对 | 第70-71页 |
| ·Smad21‐172Δ21‐30 的构建 | 第71-72页 |
| ·蛋白质的表达纯化 | 第72-76页 |
| ·His‐Smad21‐172Δ21‐30 晶体条件研究 | 第76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第8章 总结与展望 | 第77-79页 |
| ·总结 | 第77-78页 |
| ·展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 附录I | 第82-85页 |
| 附录II | 第85-88页 |
| 附录III | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第93页 |
