| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 0 前言 | 第15页 |
| 第一节 柠檬酸及其发酵工业的背景知识 | 第15-41页 |
| 1 柠檬酸的性质 | 第15-16页 |
| 2 柠檬酸的生产史 | 第16-17页 |
| ·国外柠檬酸生产研究史 | 第16页 |
| ·国内柠檬酸生产研究史 | 第16-17页 |
| 3 柠檬酸的工业生产 | 第17-27页 |
| ·柠檬酸的工业生产及市场现状 | 第17-18页 |
| ·柠檬酸的工业生产方式 | 第18-19页 |
| ·发酵生产柠檬酸的菌种 | 第19-23页 |
| ·发酵生产柠檬酸的原料 | 第23-27页 |
| 4 柠檬酸生物合成的调节及控制 | 第27-37页 |
| ·柠檬酸生物合成途径的发现 | 第27-28页 |
| ·柠檬酸生物合成途径 | 第28-30页 |
| ·柠檬酸生物合成的调节机制 | 第30-35页 |
| ·柠檬酸发酵过程控制 | 第35-37页 |
| 5 柠檬酸的提取 | 第37-39页 |
| 6 柠檬酸的主要用途 | 第39-41页 |
| 第二节 本论文研究的背景、内容和意义 | 第41-44页 |
| 第二章 海洋解脂耶罗威亚酵母菌发酵产柠檬酸的筛选及其发酵产酸的初步探索 | 第44-53页 |
| 0 前言 | 第44页 |
| 第一节 海洋 Y. lipolytica发酵产柠檬酸的筛选 | 第44-48页 |
| 1 材料和试剂 | 第44-46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-48页 |
| 第二节 发酵产酸的碳源选择和接种量确定 | 第48-52页 |
| 1 材料和试剂 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-49页 |
| 3 结果与讨论 | 第49-52页 |
| ·产酸碳源的确定 | 第49-50页 |
| ·产酸最佳葡萄糖浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·产酸最适接种量的确定 | 第51-52页 |
| 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 利用木薯淀粉发酵产柠檬酸的研究 | 第53-64页 |
| 0 前言 | 第53页 |
| 第一节 淀粉酶的获得及木薯淀粉水解液的制备 | 第53-56页 |
| 1 材料和试剂 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-56页 |
| ·淀粉酶酶活力的测定 | 第55页 |
| ·淀粉酶与底物最适配比及水解时间的确定 | 第55-56页 |
| 第二节 利用木薯淀粉水解液发酵产柠檬酸 | 第56-63页 |
| 1 材料和试剂 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| 3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| ·分批发酵过程中发酵液还原糖浓度变化 | 第58页 |
| ·分批发酵过程中菌体生长量的变化 | 第58-59页 |
| ·分批发酵过程中发酵液柠檬酸含量变化 | 第59-60页 |
| ·2-l 发酵罐分批补料发酵产柠檬酸 | 第60-63页 |
| 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 菊粉酶基因在产酸菌株中的表达及利用菊粉发酵产柠檬酸的研究 | 第64-95页 |
| 0 前言 | 第64-65页 |
| 第一节 菊粉酶基因表面展示载体的构建及表达 | 第65-83页 |
| 1 材料和试剂 | 第65-68页 |
| 2 方法 | 第68-77页 |
| 3 结果与分析 | 第77-82页 |
| ·尿嘧啶缺陷型的筛选 | 第77页 |
| ·菊粉酶基因表面展示表达载体的构建 | 第77-79页 |
| ·转化子阳性克隆的检测 | 第79-81页 |
| ·阳性转化子表面展示菊粉酶活力的测定及筛选 | 第81页 |
| ·表面展示菊粉酶表达的最佳时间测定 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-83页 |
| 第二节 表面展示菊粉酶酶学性质的研究 | 第83-89页 |
| 1 材料和试剂 | 第83-84页 |
| 2 方法 | 第84-85页 |
| 3 结果与讨论 | 第85-89页 |
| ·表面展示菊粉酶的最适反应温度及温度稳定性 | 第85-86页 |
| ·表面展示菊粉酶最适反应 pH 和 pH 稳定性 | 第86-87页 |
| ·表面展示酶的重复利用 | 第87-88页 |
| ·水解产物的薄层层析 | 第88-89页 |
| 第三节 利用菊粉一步发酵产柠檬酸 | 第89-94页 |
| 1 材料和试剂 | 第89页 |
| 2 方法 | 第89-90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-94页 |
| ·利用菊粉发酵产柠檬酸 | 第90-91页 |
| ·最佳碳源浓度的确定 | 第91-92页 |
| ·在 2-l 发酵罐中利用菊粉一步发酵产柠檬酸 | 第92-94页 |
| 本章小结 | 第94-95页 |
| 第五章 转化菌株 INU-87 的进一步遗传改良 | 第95-128页 |
| 0 前言 | 第95-97页 |
| 第一节 ACL1 基因敲除载体的构建 | 第97-103页 |
| 1 材料和试剂 | 第97-98页 |
| 2 方法 | 第98-101页 |
| 3 结果与分析 | 第101-103页 |
| ·ACL1 基因敲除载体的构建 | 第101-102页 |
| ·目的敲除片段的获得 | 第102-103页 |
| 第二节 ICL1 基因超表达载体的构建 | 第103-108页 |
| 1 材料和试剂 | 第103-104页 |
| 2 方法 | 第104-106页 |
| 3 结果与分析 | 第106-108页 |
| ·ICL1 基因超表达载体的构建 | 第106-108页 |
| ·ICL1 基因超表达载体目的片段的获得 | 第108页 |
| 第三节 菌株 INU-87 的遗传改良及阳性转化子的筛选检测 | 第108-113页 |
| 1 材料和试剂 | 第108页 |
| 2 方法 | 第108-110页 |
| 3 结果与分析 | 第110-113页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第110-111页 |
| ·阳性转化子的 PCR 检测 | 第111-113页 |
| 第四节 遗传改良对产酸菌株的影响及遗传改良菌株IAI-30在发酵产酸中的应用 | 第113-127页 |
| 1 材料和试剂 | 第113-114页 |
| 2 方法 | 第114-120页 |
| 3 结果与讨论 | 第120-127页 |
| ·ACL1 基因部分敲除对产酸菌株的影响 | 第120-122页 |
| ·ICL1 基因超表达对产酸菌株的影响 | 第122-123页 |
| ·各发酵体系柠檬酸及异柠檬酸产量比较 | 第123-124页 |
| ·利用 2-l 发酵罐一步发酵菊粉产柠檬酸 | 第124-125页 |
| ·2-l 发酵罐中利用菊芋提取液发酵产柠檬酸 | 第125-127页 |
| 本章小结 | 第127-128页 |
| 第六章 发酵液中柠檬酸的提取及精制 | 第128-134页 |
| 0 前言 | 第128页 |
| 1 材料和试剂 | 第128-129页 |
| 2 方法 | 第129-132页 |
| 3 结果及分析 | 第132-133页 |
| ·柠檬酸的提取及精制 | 第132-133页 |
| ·柠檬酸样品的高效液相色谱分析 | 第133页 |
| 本章小结 | 第133-134页 |
| 总结与创新点 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-148页 |
| 附录 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 个人简历 | 第150-151页 |
| 论文发表 | 第151页 |
