| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 缩略语表 | 第18-20页 |
| 1 前言 | 第20-31页 |
| ·立题依据 | 第20-30页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌和氟喹诺酮药物 | 第20-22页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌对氟喹诺酮类耐药机制 | 第22-25页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌中多重耐药泵研究进展 | 第25-29页 |
| ·目前鼠伤寒沙门氏菌多重耐药机制研究中存在的问题 | 第29-30页 |
| ·研究内容和目标 | 第30-31页 |
| ·检测外排氟喹诺酮类主要多重耐药泵 | 第30页 |
| ·确证调节多重耐药泵表达的主要调控蛋白 | 第30页 |
| ·研究主要调控蛋白对细菌MPC值影响 | 第30-31页 |
| 2. 材料和方法 | 第31-49页 |
| ·药物和培养基 | 第32-33页 |
| ·细菌、质粒和噬菌体 | 第33页 |
| ·药物和培养基配制 | 第33-34页 |
| ·药物配制 | 第33-34页 |
| ·培养基配制 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第35-38页 |
| ·体外诱导鉴定及MICs检测 | 第38-39页 |
| ·环丙沙星体外诱导鼠伤寒沙门氏菌CVCC541(ST) | 第38页 |
| ·诱导菌生化及PCR鉴定 | 第38页 |
| ·诱导菌MICs检测 | 第38-39页 |
| ·诱导菌MICs稳定性检测 | 第39页 |
| ·诱导菌靶位点突变检测 | 第39页 |
| ·细菌基因组提取 | 第39页 |
| ·gyrA、gyrB、parC和parE序列扩增 | 第39页 |
| ·PCR产物纯化、测序 | 第39页 |
| ·药物蓄积实验 | 第39-40页 |
| ·环丙沙星和诺氟沙星激发波长、吸收波长检测 | 第39-40页 |
| ·ST和诱导菌体内药物蓄积浓度检测 | 第40页 |
| ·诱导菌中多重耐药泵表达水平检测 | 第40-42页 |
| ·ST和诱导菌总RNA提取 | 第40-41页 |
| ·总RNA反转录 | 第41页 |
| ·检测诱导菌中外排氟喹诺酮类多重耐药泵 | 第41页 |
| ·检测多重耐药泵相对表达水平 | 第41-42页 |
| ·调控蛋白在多重耐药菌中作用 | 第42-46页 |
| ·ST中分别失活调控蛋白RamA和MarA | 第42-44页 |
| ·诱导菌中分别失活调控蛋白RamA和MarA | 第44页 |
| ·RamA互补实验 | 第44-46页 |
| ·RamA表达分子机制 | 第46-47页 |
| ·检测诱导菌多重耐药泵及调控蛋白基因序列 | 第46页 |
| ·诱导菌中过表达RamR | 第46-47页 |
| ·RamA对环丙沙星和恩诺沙星MPC值影响 | 第47-49页 |
| ·ST和SR(STramA：：aph)菌生长曲线 | 第47页 |
| ·筛选ST和SR对环丙沙星首次耐药突变株 | 第47-48页 |
| ·RamA在首次耐药突变株中过表达 | 第48页 |
| ·检测细菌对环丙沙星和恩诺沙星MPC值 | 第48-49页 |
| 3. 结果与分析 | 第49-78页 |
| ·诱导菌鉴定及药物敏感性 | 第49-51页 |
| ·三糖铁生化鉴定 | 第49页 |
| ·鼠伤寒沙门氏特异基因PCR确证 | 第49-50页 |
| ·ST及其诱导菌MICs | 第50-51页 |
| ·环丙沙星MICs稳定性 | 第51页 |
| ·诱导菌QRDRs区靶位点突变 | 第51-52页 |
| ·QRDRs靶序列扩增、测序 | 第51-52页 |
| ·QRDRs靶位点突变分析 | 第52页 |
| ·诱导菌SI2和SI6内活性多重耐药泵类型 | 第52-55页 |
| ·SI2和SI6中外排氟喹诺酮类多重耐药泵相对表达水平 | 第55-58页 |
| ·总RAN质量和浓度 | 第55页 |
| ·cDNA鉴定 | 第55-56页 |
| ·确证外排氟喹诺酮类多重耐药泵 | 第56页 |
| ·多重耐药泵acrAB和mdtK相对表达水平 | 第56-58页 |
| ·确证多重耐药泵(AcrAB和MdtK)主要调控蛋白 | 第58-67页 |
| ·ST中调控蛋白(RamA和MarA)失活菌基因型鉴定 | 第58-61页 |
| ·SI2和SI6中调控蛋白(RamA和MarA)失活菌基因型鉴定 | 第61-62页 |
| ·调控蛋白失活菌MICs | 第62-64页 |
| ·主要调控蛋白RamA对细菌耐药表型贡献 | 第64-67页 |
| ·RamR对ramA负调控作用 | 第67-71页 |
| ·诱导菌多重耐药泵及其调控蛋白基因序列分析 | 第67-70页 |
| ·RamR对诱导菌耐药表型贡献 | 第70-71页 |
| ·RamA在ST及其环丙沙星首次突变株中作用 | 第71-78页 |
| ·RamA对ST菌生长性能影响 | 第71-72页 |
| ·RamA对ST菌环丙沙星首次突变株筛选率影响 | 第72-73页 |
| ·RamA对SR4-3和SR1-9菌药物敏感性影响 | 第73-74页 |
| ·RamA对不同耐药菌突变抑制浓度和突变率影响 | 第74-78页 |
| 4. 讨论 | 第78-86页 |
| ·MdtK和AcrAB协同作用导致鼠伤寒沙门氏菌对氟喹诺酮类耐药 | 第78-80页 |
| ·RamR-RamA是外排氟喹诺酮类多重耐药泵主要调控体系 | 第80-83页 |
| ·新GyrB靶位点突变导致细菌对氟喹诺酮类敏感性下降 | 第83页 |
| ·RamA表达促进环丙沙星耐药突变株产生 | 第83-86页 |
| 5. 创新总结 | 第86-87页 |
| 6. 细菌多重耐药研究进展(综述) | 第87-100页 |
| ·多重耐药泵研究现状 | 第88-94页 |
| ·ATP结合盒多药家族 | 第88-89页 |
| ·主要易化子超家族 | 第89-91页 |
| ·小多药耐药家族 | 第91-92页 |
| ·耐药节结化分化家族 | 第92-93页 |
| ·多药及毒性化合物外排家族 | 第93-94页 |
| ·多重耐药泵调节 | 第94-97页 |
| ·内源蛋白调控 | 第94-97页 |
| ·碱基突变 | 第97页 |
| ·其它基因插入 | 第97页 |
| ·多重耐药泵抑制剂 | 第97-98页 |
| ·植物提取物 | 第97-98页 |
| ·离子载体类药物 | 第98页 |
| ·合成短肽 | 第98页 |
| ·多重耐药泵的共性及其它作用 | 第98-99页 |
| ·多重耐药泵研究展望 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-147页 |
| 附录1 作者简介 | 第121-122页 |
| 附录2 测序图谱 | 第122-147页 |
| 附件 | 第147页 |
