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寄生疫霉菌结构独特的质膜氢离子通道蛋白基因PnPMA1功能的初步研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第一章 文献综述第11-39页
   ·卵菌基因组学和功能基因组学第12-24页
     ·卵菌基因组测序第12-16页
     ·卵菌BAC文库第16页
     ·卵菌转录组学第16-17页
     ·卵菌的分子遗传操作第17-19页
     ·基因沉默技术在卵菌基因功能分析中的应用第19-22页
     ·基因组定向诱变技术在卵菌中的应用第22页
     ·异源表达在卵菌基因功能分析中的应用第22-24页
   ·卵菌病害模式系统第24-25页
   ·一种潜在的新型植物抗病策略-寄主诱导的基因沉默第25-29页
   ·疫霉菌阶段发育的分子生物学第29-34页
   ·质膜氢离子通道蛋白第34-37页
     ·质膜氢离子通道蛋白的空间结构第35-36页
     ·质膜氢离子通道蛋白基因翻译水平的调控第36页
     ·质膜氢离子通道蛋白基因翻译后水平的调控第36-37页
     ·质膜氢离子通道蛋白的生物学功能第37页
   ·本研究的目的和意义第37-39页
第二章 寄生疫霉菌PnPMA1在游动孢子发育中的作用第39-65页
   ·试验材料第40页
     ·菌株、质粒第40页
     ·植物材料第40页
   ·试验方法第40-52页
     ·PnPMA1亚细胞定位分析第40-43页
     ·利用lacZ基因融合的生物化学方法分析PnPMA1拓扑结构第43-46页
     ·基因沉默转化子的获得第46-48页
     ·Northern blot检测疫霉菌沉默转化子中siRNA的表达第48-49页
     ·实时定量PCR检测转化子中PnPMA1的表达第49-51页
     ·沉默转化子表型分析第51-52页
   ·结果与分析第52-62页
     ·PnPMA1的亚细胞定位第52-53页
     ·PnPMA1的拓扑结构分析第53-55页
     ·PnPMA1沉默转化子的制备第55-57页
     ·PnPMA1基因沉默转化子菌落形态和生长速率未受到影响第57页
     ·PnPMA1基因沉默转化子产生不游动的游动孢子第57-60页
     ·PnPMA1基因沉默转化子产生大的畸形游动孢子第60-62页
   ·讨论第62-65页
第三章 寄主诱导的基因沉默在卵菌中应用的可行性研究第65-82页
   ·试验材料第65-66页
     ·菌株、质粒第65页
     ·植物材料第65-66页
   ·试验方法第66-70页
     ·植物表达载体构建第66-67页
     ·农杆菌的电击转化和阳性克隆的鉴定第67-68页
     ·拟南芥的培养第68页
     ·拟南芥的转化第68页
     ·拟南芥转化子的筛选第68-69页
     ·拟南芥基因组DNA的提取第69页
     ·转基因拟南芥的PCR鉴定第69页
     ·拟南芥RNA的提取第69页
     ·Northern blot检测转基因拟南芥中siRNA的表达第69-70页
     ·拟南芥接菌测试第70页
     ·细胞学观察第70页
     ·实时定量PCR检测疫霉菌中靶基因的表达第70页
   ·结果与分析第70-78页
     ·寄生疫霉菌中存在小RNA介导的基因沉默通路第70-72页
     ·制备表达GFP和PnPMA1基因dsRNA的转基因拟南芥第72-73页
     ·定殖的寄生疫霉菌中GFP的荧光信号未受到转dsGFP寄主植物的干扰第73-75页
     ·定殖的寄生疫霉菌中靶基因的转录未受到转基因植物的影响第75-77页
     ·从病组织再分离的疫霉菌中未检测到靶基因同源的siRNA分子第77-78页
     ·转基因拟南芥中定殖的寄生疫霉菌游动孢子游动性未受到影响第78页
   ·讨论第78-82页
第四章 结论第82-84页
   ·结论第82页
   ·创新点第82-83页
   ·研究展望第83-84页
参考文献第84-98页
致谢第98-99页
作者简介第99页

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