| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 综述与导言 | 第10-29页 |
| ·yigP基因的基本介绍 | 第10-12页 |
| ·前期研究结果综述 | 第12-13页 |
| ·yigP是大肠杆菌生长必需的持家基因 | 第12页 |
| ·yigP基因没有数据库预测的那么长 | 第12-13页 |
| ·yigP有其独立的启动子 | 第13页 |
| ·本课题研究思路 | 第13-15页 |
| ·证实yigP为sRNA编码基因 | 第13页 |
| ·测定yigP基因的表达时相 | 第13-14页 |
| ·RACE确定yigP基因转录起点和转录终点 | 第14页 |
| ·生物信息学预测yigP可能调节的靶基因 | 第14页 |
| ·靶基因的鉴定 | 第14-15页 |
| ·相关技术、知识综述 | 第15-29页 |
| ·大肠杆菌同源重组技术 | 第15-16页 |
| ·温敏质粒灭活基因原理 | 第16-17页 |
| ·启动子鉴定原理 | 第17页 |
| ·移码突变技术与重叠引物延伸PCR | 第17-18页 |
| ·定量PCR技术与实时荧光定量PCR技术 | 第18-22页 |
| ·3’RACE技术 | 第22-24页 |
| ·5’RACE技术 | 第24-27页 |
| ·sRNA靶基因预测技术 | 第27页 |
| ·sRNA靶基因鉴定技术 | 第27-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-43页 |
| ·材料与仪器 | 第29-35页 |
| ·化学药品与试剂 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29-31页 |
| ·生物药品与试剂 | 第31-32页 |
| ·细菌培养基 | 第32-33页 |
| ·缓冲液 | 第33页 |
| ·菌种 | 第33-34页 |
| ·载体质粒 | 第34页 |
| ·重组质粒 | 第34-35页 |
| ·生物学软件 | 第35页 |
| ·微生物学方法 | 第35-36页 |
| ·细菌培养条件 | 第35页 |
| ·菌种的保藏 | 第35-36页 |
| ·遗传学方法 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| ·分子生物学方法 | 第36-39页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA提取 | 第36-38页 |
| ·DNA纯化回收 | 第38-39页 |
| ·RNA相关实验方法 | 第39-41页 |
| ·RNA相关实验操作原则 | 第39-40页 |
| ·RNA实验相关物品的处理 | 第40页 |
| ·细菌总RNA的制备 | 第40-41页 |
| ·RNA沉淀纯化 | 第41页 |
| ·RNA反转录 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌细胞绿色荧光强度测定 | 第42-43页 |
| 第3章 结果与分析 | 第43-83页 |
| ·移码突变实验：yigP为sRNA编码基因 | 第43-49页 |
| ·移码突变yigP表达质粒的构建 | 第44-48页 |
| ·重组质粒pT-YM对yigP基因缺陷株的功能回补 | 第48-49页 |
| ·实时荧光定量PCR：yigP在指数生长期旺盛的表达 | 第49-58页 |
| ·大肠杆菌生长曲线的测定及菌体的收集 | 第50-52页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第52-53页 |
| ·随机引物反转录总RNA为cDNA | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量PCR比较各时期yigP的表达量 | 第54-58页 |
| ·PCR效率的验证 | 第54-56页 |
| ·不同生长时期yigP表达量的分析 | 第56-58页 |
| ·5'RACE,3’RACE技术：yigiP可转录出长度约为250bp的RNA | 第58-70页 |
| ·菌体收集及细胞总RNA的抽提 | 第58-60页 |
| ·5’RACE测定yigP的转录起点 | 第60-65页 |
| ·特异性引物反转录yigP RNA为cDNA | 第61-62页 |
| ·末端转移酶(TdT)在cDNA末端加poly(dA)尾 | 第62页 |
| ·巢式PCR扩增yigP基因的5’末端 | 第62-63页 |
| ·yigP基因5’端序列克隆、鉴定、测序 | 第63-64页 |
| ·5’RACE测序结果分析,确定yigP转录起点 | 第64-65页 |
| ·3’RACE测定yigP的转录终点 | 第65-70页 |
| ·poly(A)聚合酶在细胞总RNA末端加poly(A)尾 | 第65页 |
| ·oligo(dT)-PCR anchor引物反转录poly(A)RNA | 第65-67页 |
| ·巢式PCR扩增yigP基因的3’末端 | 第67-68页 |
| ·yigP基因3’端序列克隆、鉴定、测序 | 第68-69页 |
| ·3’RACE测序结果分析,确定yigP转录终点 | 第69-70页 |
| ·生物信息学预测：yigP可能调节的29个靶基因 | 第70-72页 |
| ·靶基因的鉴定：yigP显著增强基因ssuA和kdsD的表达 | 第72-83页 |
| ·报告质粒的构建 | 第73-80页 |
| ·Ⅰ类靶基因构建于报告质粒pXG-10 | 第73-77页 |
| ·Ⅱ类靶基因构建于报告质粒pXG-30 | 第77-80页 |
| ·激发质粒及双质粒检测系统的构建 | 第80页 |
| ·细胞绿色荧光强度的测定 | 第80-83页 |
| 第4章 讨论 | 第83-86页 |
| ·微生物中的yigP基因 | 第83页 |
| ·原核生物中的持家sRNA基因 | 第83-84页 |
| ·yigP基因的结构 | 第84-85页 |
| ·DNA序列分析及预测 | 第85-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
