杨树CCR基因RNAi表达载体的构建及其转化研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·木质素生物合成途径 | 第10-13页 |
| ·苯丙烷类代谢途径 | 第11-13页 |
| ·木质素特异合成途径 | 第13页 |
| ·木质素基因工程研究进展 | 第13-17页 |
| ·木质素总量合成的生物调控 | 第14-15页 |
| ·木质素单体特异合成相关酶的调控 | 第15-17页 |
| ·RNAi机制和原理 | 第17-18页 |
| ·杨树遗传转化技术 | 第18-21页 |
| ·农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| ·外源DNA直接导入法 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-23页 |
| ·本课题的研究意义 | 第21页 |
| ·本研究的内容、目标 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·研究目标 | 第22页 |
| ·本研究采用的技术路线 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-24页 |
| ·目的基因片段CCR | 第24页 |
| ·CCR基因PCR反应的引物 | 第24页 |
| ·转化植株PCR检测的引物 | 第24页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·有关试剂和培养基的配制 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-35页 |
| ·杨树叶片的组织培养 | 第26页 |
| ·目的基因片段的确定 | 第26-28页 |
| ·RNAi+2F载体的构建 | 第28-31页 |
| ·pBI121+2F干涉表达载体的构建 | 第31页 |
| ·pBI121+2F干涉表达载体转化农杆菌 | 第31-32页 |
| ·卡那霉素抗性筛选 | 第32页 |
| ·杨树最佳遗传转化体系的建立 | 第32-34页 |
| ·目的基因转化南林95 | 第34页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第34页 |
| ·转化植株木质素含量的检测 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第35页 |
| ·杨树基因组提取 | 第35页 |
| ·目的干涉片段的扩增 | 第35页 |
| ·载体构建验证 | 第35-37页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第35-36页 |
| ·克隆干涉片段2F的序列分析 | 第36页 |
| ·pBI121+2F表达载体构建验证 | 第36-37页 |
| ·干涉载体直接导入农杆菌的验证 | 第37-38页 |
| ·酶切验证 | 第37页 |
| ·PCR验证 | 第37-38页 |
| ·卡那霉素筛选浓度的确定 | 第38-39页 |
| ·南林95叶片分化的卡那霉素敏感性试验 | 第38页 |
| ·南林95生根的卡那霉素敏感性试验 | 第38-39页 |
| ·遗传转化体系正交试验设计分析 | 第39-42页 |
| ·正交试验结果的直观分析 | 第39页 |
| ·因素内各水平对遗传转化的影响 | 第39-42页 |
| ·目的基因的转化 | 第42页 |
| ·抗性植株PCR检测 | 第42页 |
| ·转基因株木质素含量测定 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 6 讨论 | 第45-47页 |
| ·pBI121+2F表达载体的构建 | 第45页 |
| ·Kan筛选临界浓度的确定 | 第45-46页 |
| ·杨树最佳遗传转化体系的建立 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
| 成果清单 | 第64页 |
