| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-26页 |
| ·头孢菌素类抗生素 | 第9-12页 |
| ·基本结构 | 第9-10页 |
| ·抑菌机理 | 第10-11页 |
| ·市场状况 | 第11-12页 |
| ·7-氨基头孢烷酸 | 第12-15页 |
| ·生产方法 | 第12-14页 |
| ·市场状况 | 第14-15页 |
| ·头孢菌素酰化酶 | 第15-23页 |
| ·分类和性质 | 第15-17页 |
| ·克隆和表达 | 第17-19页 |
| ·催化机理 | 第19-21页 |
| ·CCA 活性的提高 | 第21-23页 |
| ·在大肠杆菌中高效可溶性表达外源蛋白 | 第23-25页 |
| ·影响外源蛋白表达量的因素 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌的培养与诱导方法 | 第24-25页 |
| ·论文的目的和意义 | 第25-26页 |
| ·目的和意义 | 第25页 |
| ·主要内容 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第26-28页 |
| ·酶与试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·抗生素、诱导剂 | 第28-29页 |
| ·缓冲溶液 | 第29-30页 |
| ·发酵罐 | 第30页 |
| ·软件 | 第30页 |
| ·分子生物学与生物化学操作方法 | 第30-36页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·DNA 限制性内切酶酶切操作 | 第31-32页 |
| ·双链DNA 末端的平滑化 | 第32-33页 |
| ·DNA 连接反应 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| ·菌落PCR | 第35页 |
| ·DNA 纯化与质粒提取 | 第35页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35-36页 |
| ·菌的培养与保存 | 第36页 |
| ·菌体超声破碎 | 第36页 |
| ·固定化金属螯合层析 | 第36-37页 |
| ·头孢菌素C 酰化酶酶活的测定 | 第37-39页 |
| 第3章 CPC 酰化酶基因的组成型表达 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·pGEMKT-HPR-fcpca 质粒的构建 | 第40-45页 |
| ·构建思路 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增cpca 基因片段 | 第41-42页 |
| ·酶切、连接和转化 | 第42-43页 |
| ·菌落PCR 和质粒酶切验证 | 第43-45页 |
| ·重组菌株的酰化酶活性验证 | 第45页 |
| ·pGEMKT-oriP-cpca 质粒的构建 | 第45-50页 |
| ·构建思路 | 第45页 |
| ·PCR 扩增oriP 基因片段 | 第45-48页 |
| ·酶切、连接和转化 | 第48-49页 |
| ·质粒酶切及测序结果 | 第49-50页 |
| ·重组菌株的酰化酶活性验证 | 第50页 |
| ·结果分析 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 CPC 酰化酶基因的诱导型表达 | 第53-67页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·pET28-cpca、pET30-cpca 重组质粒的构建 | 第53-61页 |
| ·构建思路 | 第53-54页 |
| ·PCR 扩增cpca 基因片段 | 第54-56页 |
| ·酶切、连接和转化 | 第56-57页 |
| ·菌落PCR 和质粒酶切验证 | 第57-59页 |
| ·重组菌株的酰化酶活性验证 | 第59-60页 |
| ·宿主的更换 | 第60-61页 |
| ·PET30-cpca 质粒的片段切除及验证 | 第61-64页 |
| ·构建思路 | 第61-62页 |
| ·酶切、切平、连接和转化 | 第62-63页 |
| ·质粒酶切验证 | 第63页 |
| ·重组菌株CPC 酰化酶活性验证 | 第63-64页 |
| ·cpca 诱导型表达体系比较分析 | 第64-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 CPC 酰化酶纯化及催化性质的研究 | 第67-73页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·CPC 酰化酶的纯化 | 第67-68页 |
| ·粗酶液的制备 | 第67-68页 |
| ·酶的纯化 | 第68页 |
| ·纯化效果 | 第68页 |
| ·pH 对CPC 酰化酶活性及稳定性的影响 | 第68-70页 |
| ·pH 对CPC 酰化酶活性的影响 | 第68-69页 |
| ·pH 对CPC 酰化酶稳定性的影响 | 第69-70页 |
| ·温度对CPC 酰化酶活性及稳定性的影响 | 第70-71页 |
| ·温度对CPC 酰化酶活性的影响 | 第70-71页 |
| ·温度对CPC 酰化酶稳定性的影响 | 第71页 |
| ·CPC 酰化酶催化过程研究 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第6章 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 附录A cpca 基因序列 | 第78-79页 |
| 附录B 启动子oriP 基因序列 | 第79-80页 |
| 附录C 酶活测定原始数据 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第82页 |