| 摘要 | 第1-5页 |
| SUMMARY | 第5-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| ·TGF-B超家族 | 第10页 |
| ·骨形态发生蛋白(BMPs)的研究进展 | 第10-12页 |
| ·BMPs的发现简史 | 第10页 |
| ·BMPs的组织分布 | 第10-11页 |
| ·BMP的染色体定位 | 第11页 |
| ·BMP的结构 | 第11-12页 |
| ·骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的研究进展 | 第12-16页 |
| ·BMP-7的分子结构特点 | 第12-13页 |
| ·BMP-7的受体及信号传递 | 第13页 |
| ·BMP-7的调节 | 第13-14页 |
| ·生物学作用 | 第14-16页 |
| ·BMP-7在胚胎发育过程中的作用 | 第14页 |
| ·BMP-7在骨骼系统的作用 | 第14页 |
| ·BMP-7在神经系统的作用 | 第14-15页 |
| ·BMP-7对肾脏的保护作用 | 第15-16页 |
| ·BMP-7的前景 | 第16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-37页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·质粒和菌种 | 第17页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·主要试剂及来源 | 第17-18页 |
| ·主要仪器、设备 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-37页 |
| ·常用培养基、缓冲液与试剂的配制 | 第19-22页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·常用贮液与溶液 | 第19-21页 |
| ·染料、电泳缓冲液、凝胶加样液 | 第21-22页 |
| ·总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·试剂盒提取总RNA | 第22页 |
| ·Animal RNAout提取总RNA | 第22页 |
| ·RNA质量的检测 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·兔部分cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第24页 |
| ·反转录反应 | 第24-25页 |
| ·PCR反应 | 第25页 |
| ·3′RACE技术 | 第25-27页 |
| ·3′RACE原理 | 第25-26页 |
| ·3′RACE引物的设计 | 第26页 |
| ·3′RACE反应 | 第26页 |
| ·套式PCR反应 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆、鉴定和测序 | 第27-30页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第28-30页 |
| ·重组质粒DNA测序 | 第30页 |
| ·DNA序列相似性检索鉴定及其分析 | 第30页 |
| ·DNA序列相似性检索鉴定 | 第30页 |
| ·家兔与其它哺乳动物BMP-7 3'UTR比较生物信息学分析 | 第30页 |
| ·家兔BMP-7基因的组织表达谱初步研究 | 第30-31页 |
| ·家兔BMP-7基因成熟肽的原核表达初步研究 | 第31-37页 |
| ·目的片段的制备 | 第31-32页 |
| ·构建pET32a-BMP-7重组质粒 | 第32-33页 |
| ·序列测序 | 第33页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第33-34页 |
| ·重组原核工程菌pET32a-BMP-7/BL21(DE3)的优化表达 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第34-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-61页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第37页 |
| ·家兔BMP-7基因的克隆及分析 | 第37-49页 |
| ·家兔BMP-7基因部分编码区的克隆 | 第37-38页 |
| ·目的基因的扩增 | 第37-38页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第38页 |
| ·家兔BMP-7基因3'端非翻译序列的克隆 | 第38-41页 |
| ·3'RACE扩增产物 | 第38-39页 |
| ·目的DNA的回收 | 第39页 |
| ·重组质粒及质粒的PCR和酶切鉴定 | 第39-41页 |
| ·家兔BMP-7基因cDNA序列测定与生物信息学分析 | 第41-49页 |
| ·克隆片断序列测定 | 第41-45页 |
| ·家兔BMP-7基因相似性及结构分析 | 第45页 |
| ·家兔与其它哺乳动物BMP-7 3'UTR序列对比分析 | 第45页 |
| ·人BMP-7基因转录本末端分析 | 第45-49页 |
| ·组织表达 | 第49-50页 |
| ·原核表达 | 第50-61页 |
| ·目的片段的扩增及回收 | 第50-51页 |
| ·重组质粒及其重组质粒PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·测序结果 | 第52-54页 |
| ·两克隆碱基测序结果比较分析 | 第52-53页 |
| ·两克隆相对应的氨基酸分析 | 第53页 |
| ·家兔BMP-7基因成熟肽中稀有碱基分析 | 第53-54页 |
| ·工程菌pET32a-BMP-7/BL21(DE3)的构建 | 第54页 |
| ·重组原核工程菌pET32a-BMP-7/BL21(DE3)的优化表达 | 第54-59页 |
| ·37℃诱导pET32a-BMP-7/BL21(DE3)表达 | 第54-55页 |
| ·低温诱导pET32a-BMP-7/BL21(DE3)表达 | 第55-59页 |
| ·重组原核工程菌pET32a-BMP-7/BL21(DE3)(20号质粒与7号质粒)的诱导表达对比 | 第59页 |
| ·重组原核工程菌pET32a-BMP-7/BL21(DE3)plysS的诱导表达 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| ·总RNA提取 | 第61页 |
| ·EST的开发 | 第61页 |
| ·BMP-7基因克隆与分析 | 第61页 |
| ·3'RACE | 第61-62页 |
| ·3'UTR与基因表达调节 | 第62-63页 |
| ·BMP-7蛋白性质和功能位点的预测 | 第63页 |
| ·家兔BMP-7的组织表达谱分析 | 第63-64页 |
| ·BMP-7基因的原核表达分析 | 第64-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 附录A 家兔BMP-7基因cDNA测序结果 | 第67-71页 |
| 附录B 家兔BMP-7基因GENBANK登录序列 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 个人简介 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
