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利用共生菌Lxc作为外源基因GNA的表达载体改良水稻抗虫性

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
1 文献综述第11-25页
   ·植物共生菌应用研究进展及应用前景第11-15页
     ·植物内共生菌的定义第11页
     ·植物共生菌与植物间的关系研究现状第11-12页
       ·微生物与植物间的关系第11页
       ·植物内生细菌和植物间的关系第11-12页
     ·植物共生细菌应用研究进展第12-14页
       ·植物生长促进细菌的研究第12-13页
       ·PGPB促进植物生长的机制第13-14页
     ·基因工程改造内共生菌研究进展第14-15页
       ·应用植物内生菌作为植物遗传载体的优势第14-15页
       ·植物内生菌表达外源基因的应用研究第15页
   ·植物内共生菌Leifsonia xyli Subsp.cynodontis的研究现状第15-18页
     ·Leifsonia xyli Subsp.cynodont&的发现第15-16页
     ·Leifsonia xyli subsp.cynodont&和植物内生研究进展第16页
     ·Leifsonia xyli subsp.cynodontis分子生物学研究和基因工程研究第16-18页
     ·Leifsonia xyli subsp.cynodont&研究前景第18页
   ·应用雪花莲外源凝集素基因抗虫研究进展第18-23页
     ·GNA的构造第19页
     ·GNA的抗虫机理第19-20页
     ·含GNA的人工饲料对害虫的抗生作用第20-21页
       ·GNA对一些害虫的拒食作用第20页
       ·GNA可抑制害虫的生长发育,有直接毒杀作用第20-21页
     ·转GNA植物研究现状第21页
     ·重组GNA研究现状第21-22页
     ·转GNA水稻研究现状第22-23页
   ·本研究内容、目的和意义第23-25页
2 材料与方法第25-34页
   ·供试水稻材料第25页
   ·质粒和引物第25页
   ·菌株和培养基第25页
   ·Lxc接种水稻方法第25-26页
     ·浸种接种第25-26页
     ·剪叶接种第26页
   ·水稻水培实验第26页
   ·水稻大田实验第26-27页
   ·检测水稻中Lxc定殖第27-28页
     ·PCR检测Lxc在水稻上定殖第27-28页
       ·水稻DNA提取步骤第27页
       ·PCR反应第27-28页
     ·荧光法检测GUS基因在宿主植物水稻中的表达第28页
       ·荧光法GUS提取缓冲液第28页
       ·荧光法GUS分析缓冲液第28页
       ·操作步骤第28页
   ·抽穗期调查与农艺性状考种第28-29页
   ·受体菌感受态制备与转化第29-30页
     ·大肠杆菌感受态制备与转化第29-30页
       ·转化溶液第29页
       ·大肠杆菌受体菌的培养第29页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第29页
       ·DNA转化第29-30页
     ·Lxc菌感受态制备与转化第30页
       ·Lxc菌感受态制备第30页
       ·DNA转化第30页
   ·提质粒第30-31页
     ·碱法提质粒(大肠杆菌)第30-31页
     ·STE法提质粒(Lxc)第31页
   ·构建Lxc/GNA第31-32页
     ·构建pET28a/GNA第31-32页
     ·构建Lxc/GNA第32页
   ·GNA基因在BL21中诱导表达第32页
     ·转化获得BL21/GNA第32页
     ·诱导表达第32页
   ·水稻褐飞虱抗性鉴定第32页
     ·飞虱寄居数量调查第32页
     ·抗飞虱鉴定第32页
   ·可溶性蛋白的测定第32-33页
   ·可溶性糖的测定第33页
   ·氨基酸的测定第33-34页
3 结果和分析第34-53页
   ·Lxc/GUS和水稻共生及其影响第34-43页
     ·Lxc对水稻种子萌发及苗期的影响第34-36页
       ·Lxc浸种对出芽率的影响第34页
       ·浸种后水稻种子的成苗率第34-35页
       ·株高比较第35-36页
     ·水稻中Lxc的定殖检测第36-38页
       ·PCR检测Lxc/GNA在水稻中的定殖第36-37页
       ·以MUG作底物检测GUS在水稻上表达第37-38页
     ·水稻抽穗调查第38-39页
     ·Lxc对水稻产量性状的影响第39-43页
   ·构建杀虫共生菌Lxc/GNA及水稻抗飞虱鉴定第43-47页
     ·构建Lxc/GNA第43页
     ·检测GNA在BL21上的诱导表达第43-44页
     ·PCR检测Lxc/GNA在水稻中的定殖第44页
     ·Lxc/GNA接种水稻后对水稻抗飞虱研究第44-47页
       ·水稻接种后生长状况第44-45页
       ·褐飞虱寄居数量变化第45-46页
       ·接种水稻抗褐飞虱鉴定第46-47页
   ·接种Lxc/GNA对水稻氨基酸含量的影响第47-53页
     ·可溶性蛋白含量和可溶性糖含量变化第47-48页
     ·氨基酸含量比较第48-53页
       ·早籼D68氨基酸含量比较第48-49页
       ·绵恢725氨基酸含量比较第49页
       ·美国茉莉香粘氨基酸含量比较第49-53页
4 结论与讨论第53-56页
   ·Lxc可以和水稻植株共生,并且对某些品种有促生效应第53-54页
   ·浸种接种方法简便易行第54页
   ·外源基因可以通过Lxc共生在水稻体内表达第54页
   ·GNA基因可以通过Lxc/GNA接种增加水稻抗虫性第54-55页
   ·接种对水稻氨基酸含量产生变化第55-56页
参考文献第56-64页
致谢第64页

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