| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·肥胖基因与瘦蛋白研究进展 | 第9-15页 |
| ·肥胖基因与肥胖 | 第9-10页 |
| ·瘦蛋白在人体代谢中的作用 | 第10-15页 |
| ·大肠杆菌基因表达系统 | 第15-21页 |
| ·大肠杆菌用于外源基因的表达 | 第15-18页 |
| ·宿主细胞的影响 | 第18-20页 |
| ·肥胖基因表达的研究进展 | 第20-21页 |
| ·本实验的研究方法及前期研究 | 第21-23页 |
| ·本实验研究方法的确立 | 第21-22页 |
| ·本实验室前期研究成果 | 第22-23页 |
| 第二章 材料和方法 | 第23-34页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·质粒模板 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·菌株及酶类 | 第23-24页 |
| ·培养基的配置 | 第24页 |
| ·主要缓冲液及试剂的配置 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·人瘦蛋白基因的 PCR 扩增 | 第25-27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27页 |
| ·重组质粒的连接、筛选和转化 | 第27-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·DNA 的序列测定 | 第31页 |
| ·Leptin 在大肠杆菌中的诱导表达与检测 | 第31-34页 |
| 第三章 结果和分析 | 第34-45页 |
| ·质粒p22 的 PCR 扩增结果 | 第34页 |
| ·回收的 PCR 产物电泳结果 | 第34-35页 |
| ·回收片段与pMD18-T 载体连接、转化后的质粒提取及酶切鉴定结果. | 第35-36页 |
| ·重组的测序质粒载体的测序结果 | 第36-37页 |
| ·从重组的 T 载体上双酶切回收人瘦蛋白基因，及pET-28a(+)载体的双酶切回收 | 第37页 |
| ·人瘦蛋白基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·人瘦蛋白基因在大肠杆菌 DH5α菌株中的表达与SDS-PAGE 检测 | 第38-41页 |
| ·人瘦蛋白基因在大肠杆菌 BL21（DE3）菌株中的表达与检测 | 第41-45页 |
| ·大肠杆菌 BL21（DE3）菌株的活化培养、感受态细胞制备与pET-28a(+)重组质粒的转化鉴定 | 第41-42页 |
| ·人瘦蛋白基因在转化的大肠杆菌 BL21（DE3）菌株中的表达与SDS-PAGE 检测 | 第42-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-57页 |
| ·关于引物的设计 | 第45页 |
| ·PCR 扩增反应条件 | 第45-48页 |
| ·Taq DNA 聚合酶与扩增温度 | 第45-46页 |
| ·关于模板使用量 | 第46-47页 |
| ·dNTP 与Mg~(2+) 浓度 | 第47-48页 |
| ·关于凝胶电泳 | 第48-50页 |
| ·转化和连接对筛选重组质粒效率的影响 | 第50页 |
| ·克隆用载体 | 第50-53页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达培养及检测 | 第53-55页 |
| ·IPTG 浓度 | 第53页 |
| ·表达培养温度 | 第53-54页 |
| ·质粒结构 | 第54页 |
| ·宿主因素 | 第54页 |
| ·RNA 的影响 | 第54-55页 |
| ·培养基组成与条件的影响 | 第55页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-OB 在大肠杆菌 DH5α菌株与 BL21（DE3）菌株中表达量存在巨大差异的原因比较分析 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者在读期间发表的相关论文 | 第64-65页 |
| 附页 | 第65页 |
