| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-46页 |
| ·盐对植物的伤害及植物耐盐机理 | 第18-20页 |
| ·盐对植物的伤害 | 第18页 |
| ·植物耐盐机理 | 第18-20页 |
| ·植物耐盐基因工程育种 | 第20-35页 |
| ·转渗透调节物质基因工程 | 第20-27页 |
| ·编码氨基酸合成的基因 | 第20-22页 |
| ·编码季铵类化合物合成的基因 | 第22-24页 |
| ·编码糖醇类化合物合成的基因 | 第24-26页 |
| ·编码多胺类化合物合成的基因 | 第26-27页 |
| ·转抗氧化酶基因工程 | 第27-28页 |
| ·转逆境保护蛋白基因工程 | 第28-29页 |
| ·渗透蛋白基因 | 第28-29页 |
| ·晚期胚胎发育丰富蛋白(LEA蛋白)基因 | 第29页 |
| ·转跨膜运输蛋白基因工程 | 第29-33页 |
| ·K~+、Na~+运转及相关基因 | 第30-32页 |
| ·Na~+区隔化或外排及相关基因 | 第32页 |
| ·水分运输及相关基因 | 第32-33页 |
| ·转信号传递基因和转录调控基因工程 | 第33-35页 |
| ·信号传递基因 | 第33页 |
| ·转录调控基因 | 第33-35页 |
| ·植物Na~+/H~+逆向转运蛋白及其在耐盐基因工程育种中的作用 | 第35-44页 |
| ·植物Na~+/H~+逆向转运蛋白的发现和基本特征 | 第35-40页 |
| ·植物Na~+/H~+逆向转运蛋白的发现 | 第35页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的细胞和染色体定位及大小 | 第35-36页 |
| ·SOS基因家族和AtNHX基因家族及与植物耐盐性 | 第36-40页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的功能 | 第40页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物耐盐性 | 第40-42页 |
| ·盐胁迫与Na~+/H~+逆向转运蛋白活性 | 第40-41页 |
| ·其他胁迫与Na~+/H~+逆向转运蛋白活性 | 第41页 |
| ·转Na~+/H~+逆向转运蛋白基因植株与其耐盐性 | 第41-42页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的分子生物学研究 | 第42-44页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的氨基酸分析 | 第43页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的表达调控 | 第43-44页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第44-45页 |
| ·本研究的技术路线 | 第45-46页 |
| 第二章 NaCl胁迫下拟南芥Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的克隆及其序列分析 | 第46-57页 |
| ·材料和方法 | 第46-51页 |
| ·材料及试剂 | 第46-47页 |
| ·植物材料及处理 | 第47页 |
| ·菌株和载体 | 第47页 |
| ·酶和试剂 | 第47页 |
| ·AtNHX1基因cDNA的克隆 | 第47-48页 |
| ·逆转录合成cDNA第一链 | 第47页 |
| ·PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·AtNHX1基因cDNA与T-载体连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第48-49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第49页 |
| ·LB培养基 | 第49页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第49-50页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第49页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第49-50页 |
| ·序列分析及同源性比较 | 第50-51页 |
| ·结果和分析 | 第51-55页 |
| ·拟南芥AtNHX1基因的分离 | 第51-52页 |
| ·AtNHX1基因与pGEM(?)-T Easy Vector连接后的重组子鉴定 | 第52-53页 |
| ·AtNHX1基因的cDNA序列 | 第53-54页 |
| ·几个物种NHX1基因cDNA序列的同源性比较 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞在不同逆境环境下检测拟南芥rd29A基因启动子的活性 | 第57-65页 |
| ·材料和方法 | 第58-60页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·rd29A启动子和GFP基因 | 第58页 |
| ·rd29A启动子驱动GFP基因植物表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·洋葱表皮细胞培养 | 第59页 |
| ·基因枪转化 | 第59-60页 |
| ·GFP绿色荧光观察 | 第60页 |
| ·实验结果与分析 | 第60-63页 |
| ·rd29A启动子驱动的GFP基因植物表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·不同培养基中rd29A启动子活性的检测 | 第61-62页 |
| ·不同培养温度下rd29A启动子活性的检测 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 pBI121载体的改造及拟南芥Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)植物表达载体的构建 | 第65-77页 |
| ·材料和方法 | 第65-70页 |
| ·菌株和载体 | 第65-66页 |
| ·酶和试剂 | 第66页 |
| ·pBI121载体的改造 | 第66页 |
| ·pBI121 NOS终止子区段(SacI-EcoRI,265bp,以下简称N区段)的PCR扩增 | 第66页 |
| ·pBI121N区段与T-载体连接 | 第66页 |
| ·重组质粒的鉴定及测序 | 第66页 |
| ·T-载体上的N区段替换pBI121载体上GUS基因后的NOS-ter区段 | 第66页 |
| ·pBI121改造载体(pBI121-GZ)终止子的功能鉴定 | 第66-68页 |
| ·pBI121-GZ与绿色荧光蛋白基因连接 | 第66-67页 |
| ·洋葱表皮细胞培养 | 第67页 |
| ·基因枪转化及显微观察 | 第67-68页 |
| ·不同启动子驱动AtNHX1基因植物表达载体的构建 | 第68-70页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第68页 |
| ·CaMV35启动子驱动AtNHX1基因表达载体的构建 | 第68页 |
| ·rd29A启动子驱动AtNHX1基因表达载体构建 | 第68-69页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌 | 第69-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-75页 |
| ·pBI121载体的改造 | 第70-72页 |
| ·pBI121N区段的分离 | 第70页 |
| ·N区段与T-载体连接及重组子鉴定 | 第70-71页 |
| ·T-载体上N区段的序列分析 | 第71-72页 |
| ·pBI121-GZ载体的构建 | 第72页 |
| ·pBI121-GZ载体终止子功能的鉴定 | 第72-73页 |
| ·pBI121-GZ载体与GFP基因连接 | 第72-73页 |
| ·pBI121-GZ+GFP载体在洋葱表皮细胞中瞬时表达 | 第73页 |
| ·不同启动子驱动AtNHX1基因植物表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·CaMV35启动子驱动AtNHX1基因植物表达载体的构建 #64. | 第74页 |
| ·rd29A启动子驱动AtNHX1基因植物表达载体的构建 | 第74页 |
| ·pBINH_(35)和pBINH_(29)工程菌的获得 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 AtNHX1与GFP融合基因表达载体的构建及其融合蛋白的细胞定位和对盐逆境的瞬时响应 | 第77-87页 |
| ·材料和方法 | 第78-80页 |
| ·菌株和载体 | 第78页 |
| ·酶和试剂 | 第78页 |
| ·AtNHX1和GFP融合基因植物表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·AtNHX1基因敲除终止密码片段的获得 | 第78页 |
| ·敲除终止子的AtNHX1基因片段连接T-载体及测序 | 第78-79页 |
| ·重组质粒的获得 | 第79-80页 |
| ·洋葱表皮细胞的培养及基因枪转化 | 第80页 |
| ·洋葱表皮细胞的培养 | 第80页 |
| ·基因枪转化 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-85页 |
| ·AtNHX1基因终止密码子敲除片段(AtNHX1-NZ)的获得 | 第81页 |
| ·AtNHX1-NZ片段与T-载体连接及重组子的鉴定 | 第81-82页 |
| ·AtNHX1和GFP融合基因植物表达载体的构建 | 第82页 |
| ·pBIAtNHX1+GFP融合基因蛋白的表达定位 | 第82-84页 |
| ·AtNHX1+GFP融合基因蛋白对盐逆境的瞬时响应 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 转拟南芥液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)烟草的获得及其耐盐性表达 | 第87-99页 |
| ·材料和方法 | 第87-92页 |
| ·材料及试剂 | 第87-88页 |
| ·植物材料及培养 | 第87页 |
| ·菌株和载体 | 第87-88页 |
| ·酶和试剂 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·烟草遗传转化和植株再生 | 第88页 |
| ·农杆菌的活化 | 第88页 |
| ·侵染和暗培养 | 第88页 |
| ·转化植株的抗性筛选 | 第88页 |
| ·转化植株的盐筛选 | 第88页 |
| ·转基因植株的PCR和PCR-Southern杂交检测 | 第88-90页 |
| ·转基因植株和对照植株的总DNA提取 | 第88-89页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第89页 |
| ·DNA探针标记及标记效率检测 | 第89-90页 |
| ·转基因植株的PCR-Southern杂交检测 | 第90页 |
| ·转基因植株的Southern杂交检测 | 第90页 |
| ·转基因植株的Northern杂交检测 | 第90-92页 |
| ·转基因植株和对照植株的总RNA提取 | 第90-91页 |
| ·RNA探针标记及标记效率检测 | 第91页 |
| ·转基因植株的Northern杂交检测 | 第91-92页 |
| ·转基因植株的耐盐性表现 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-97页 |
| ·转基因烟草植株的再生 | 第92-93页 |
| ·转基因烟草植株的PCR和PCR-Southern杂交鉴定 | 第93-95页 |
| ·转基因烟草植株的Southern杂交鉴定 | 第95页 |
| ·转基因烟草植株的Northern杂交鉴定 | 第95-96页 |
| ·转基因烟草植株的耐盐性表现 | 第96-97页 |
| ·讨论 | 第97-99页 |
| 第七章 转拟南芥AtNHX1基因马铃薯的获得及其耐盐性表现 | 第99-109页 |
| ·材料和方法 | 第100-102页 |
| ·材料及试剂 | 第100页 |
| ·植物材料及培养 | 第100页 |
| ·菌株和载体 | 第100页 |
| ·酶和试剂 | 第100页 |
| ·培养基 | 第100页 |
| ·马铃薯遗传转化和植株再生 | 第100-101页 |
| ·农杆菌的活化 | 第100-101页 |
| ·侵染和共培养 | 第101页 |
| ·转化植株的抗性筛选 | 第101页 |
| ·转基因植株的PCR和PCR-Southern杂交检测 | 第101页 |
| ·转基因植株的Southern杂交检测 | 第101页 |
| ·转基因植株的Northern杂交检测 | 第101-102页 |
| ·转基因植株的耐盐性表现 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-106页 |
| ·转基因马铃薯植株的再生 | 第102-103页 |
| ·转基因马铃薯植株的PCR和PCR-Southern杂交鉴定 | 第103-104页 |
| ·转基因马铃薯植株的Southern杂交鉴定 | 第104-105页 |
| ·转基因烟草植株的Northern杂交鉴定 | 第105-106页 |
| ·转基因马铃薯植株的耐盐性表现 | 第106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| 第八章 讨论 | 第109-115页 |
| ·Na+/H+逆向转运蛋白与植物耐盐基因工程 | 第109-110页 |
| ·拟南芥AtNHX1基因的克隆及其在细胞中的定位和功能鉴定 | 第110-112页 |
| ·逆境诱导型启动子的功能鉴定和应用 | 第112-113页 |
| ·马铃薯转化外植体的选择及转基因耐盐马铃薯的获得 | 第113-114页 |
| ·存在的问题及展望 | 第114-115页 |
| 第九章 结论 | 第115-116页 |
| ·克隆到拟南芥Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AtNHX1) | 第115页 |
| ·检测到rd29A基因启动子具逆境诱导活性 | 第115页 |
| ·构建了不同启动子驱动AtNHX1基因的植物表达载体 | 第115页 |
| ·进行了AtNHX1基因的亚细胞定位和瞬时及稳定性抗盐能力检测 | 第115页 |
| ·转AtNHX1基因马铃薯的获得 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-133页 |
| 附录Ⅰ AtNHX1基因在GenBank登记信息 | 第133-134页 |
| 附录Ⅱ 博士在读期间发表的论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 作者简介 | 第136-137页 |
| 导师简介 | 第137-138页 |
