| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-32页 |
| ·猪链球菌病 | 第17页 |
| ·猪链球菌毒力相关因子 | 第17-23页 |
| ·荚膜(CPS) | 第18-19页 |
| ·细胞壁 | 第19页 |
| ·生物被膜(Biofilm) | 第19-20页 |
| ·表面蛋白 | 第20-22页 |
| ·分泌蛋白 | 第22-23页 |
| ·猪链球菌毒力调控机制 | 第23-25页 |
| ·单元系统 | 第23-24页 |
| ·双元系统 | 第24-25页 |
| ·猪链球菌的致病机理 | 第25-29页 |
| ·猪链球菌在上呼吸道的定植与入侵 | 第25-26页 |
| ·猪链球菌在宿主血液循环的存活与扩散 | 第26-27页 |
| ·猪链球菌致败血性休克的机制 | 第27-28页 |
| ·猪链球菌致脑膜炎的机制 | 第28-29页 |
| ·蛋白质相互作用技术手段 | 第29-31页 |
| ·双杂交系统 | 第30页 |
| ·亲和纯化 | 第30页 |
| ·Blue native PAGE | 第30-31页 |
| ·蛋白质微阵列芯片 | 第31页 |
| ·本研究的内容与目标 | 第31-32页 |
| 第2章 猪链球菌2型新型保护性抗原HP0197与宿主细胞相互作用的研究 | 第32-52页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-41页 |
| ·主要试剂 | 第32-34页 |
| ·主要缓冲液 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·菌株的培养条件及菌株的构建 | 第35-36页 |
| ·生长曲线的测定 | 第36页 |
| ·细胞系及其培养条件 | 第36-37页 |
| ·蛋白质的重组表达及纯化 | 第37-38页 |
| ·蛋白质的定量 | 第38页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第38-39页 |
| ·流式细胞技术分析 | 第39页 |
| ·鉴定HP0197在猪脑组织中的受体分子 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白HP0197与葡萄糖的结合分析 | 第40页 |
| ·凝胶阻滞分析CcpA的DNA结合活性 | 第40-41页 |
| ·统计学分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-48页 |
| ·HP0197可以粘附到Hep-2细胞表面 | 第41-42页 |
| ·肝素分子可以抑制HP0197与Hep-2细胞的相互作用 | 第42-44页 |
| ·HP097可以与宿主脑组织中非蛋白质组份相互作用 | 第44-45页 |
| ·HP0197可以与葡萄糖分子结合 | 第45-47页 |
| ·hp0197基因的缺失可以通过改变HPr的磷酸化而进一步影响CcpA的功能 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-52页 |
| ·HP0197是一个未知功能的SS2表面毒力相关蛋白 | 第48-49页 |
| ·HP0197是一个新型的细菌表面糖结合蛋白 | 第49页 |
| ·HP0197通过与肝素分子结合可能参与S suis的致病过程 | 第49-50页 |
| ·HP0197可能协助S suis获得更多的葡萄糖 | 第50页 |
| ·HP0197能够参与S suis的能量代谢 | 第50-51页 |
| ·HP0197在S suis与宿主相互作用过程中发扮演着重要的角色 | 第51-52页 |
| 第3章 大尺度鉴定病原菌表面蛋白与宿主细胞表面分子之间的相互作用 | 第52-83页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·材料与方法 | 第53-59页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要缓冲液 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·菌株与培养条件 | 第54页 |
| ·细胞系及其培养条件 | 第54页 |
| ·生物素化的Hep-2细胞表面分子的制备 | 第54页 |
| ·Hep-2细胞表面分子生物素化的检测 | 第54-55页 |
| ·生物素化分子的固定 | 第55页 |
| ·证实生物素化蛋白与树脂的结合 | 第55页 |
| ·SS2表面蛋白的制备 | 第55页 |
| ·从SS2表面蛋白中捕获SIPs | 第55-56页 |
| ·胰酶水解 | 第56页 |
| ·HPLC-MS/MS分析及蛋白质的鉴定 | 第56页 |
| ·重组,表达以及纯化被捕获的SS2蛋白 | 第56-57页 |
| ·蛋白质的定量 | 第57页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第57-58页 |
| ·流式细胞技术分析 | 第58页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第58页 |
| ·竞争性抑制分析 | 第58-59页 |
| ·检测HAM1抗体的特异性 | 第59页 |
| ·统计学分析 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-78页 |
| ·证实Hep-2细胞表面分子的生物素化以及生物素化分子与树脂的结合 | 第59-61页 |
| ·质谱鉴定SS2的SIPs | 第61-75页 |
| ·SIPs在SS2的表面定位 | 第75-76页 |
| ·证实SIPs与Hep-2细胞的相互作用 | 第76页 |
| ·Enolase、DnaK以及HAM1是SS2主要的粘附蛋白 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-83页 |
| ·鉴定病原菌SIPs是研究病原菌与宿主相互作用的重要手段 | 第78页 |
| ·ACSP技术能够很好的鉴定细菌与宿主细胞胞外分子之间的相互作用 | 第78-79页 |
| ·Enolase、DnaK与HAM1参与SS2的致病过程 | 第79-81页 |
| ·没有抑制作用的蛋白也可能参与SS2的致病过程 | 第81页 |
| ·未被选择的蛋白也可能参与SS2的致病过程 | 第81-82页 |
| ·ACSP技术是一个有价值的研究细菌与宿主相互作用的工具 | 第82-83页 |
| 第4章 猪链球菌免疫原性蛋白HP0272的保护力评价 | 第83-94页 |
| ·前言 | 第83页 |
| ·材料与方法 | 第83-88页 |
| ·主要试剂 | 第83-84页 |
| ·主要缓冲液 | 第84页 |
| ·主要仪器设备 | 第84页 |
| ·菌株与培养条件 | 第84页 |
| ·重组蛋白的质谱鉴定 | 第84-85页 |
| ·蛋白质的定量 | 第85页 |
| ·实验动物 | 第85页 |
| ·小鼠的免疫 | 第85页 |
| ·小鼠的人工感染 | 第85页 |
| ·抗体滴度的检测 | 第85-86页 |
| ·qPCR检测hp0272在体内和体外时的表达 | 第86-88页 |
| ·PCR检测hp0272在各菌株中的分布 | 第88页 |
| ·统计学分析 | 第88页 |
| ·结果与分析 | 第88-92页 |
| ·重组蛋白HP0272的表达 | 第88-89页 |
| ·HP0272是一个C端锚定的S.suis表面蛋白 | 第89-90页 |
| ·小鼠的免疫反应 | 第90-91页 |
| ·小鼠的人工感染 | 第91页 |
| ·hp0272基因在S.suis分离菌中的分布 | 第91-92页 |
| ·HP0272是一个体内诱导抗原 | 第92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·HP0272是一个有价值的疫苗候选抗原 | 第92-93页 |
| ·佐剂对疫苗效果的影响 | 第93页 |
| ·HP0272分子量偏大的原因 | 第93页 |
| ·HP0272可能在致病过程中发挥着重要作用 | 第93-94页 |
| 第5章 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 附录 | 第119-120页 |
