| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第14页 |
| 2 稻瘟病菌的生活史和侵染循环 | 第14-16页 |
| 3 稻瘟病菌附着胞形成过程的调控 | 第16-23页 |
| ·对植物表面信号分子的识别 | 第16-18页 |
| ·信号传导过程 | 第18-22页 |
| ·附着胞形成 | 第22-23页 |
| 4 稻瘟病菌侵入和侵入后生长的调控 | 第23-25页 |
| ·附着胞的穿透 | 第23-24页 |
| ·侵入后生长 | 第24-25页 |
| 5 HMG非组蛋白的功能 | 第25-29页 |
| ·HMG蛋白 | 第25页 |
| ·HMG家族及其分类 | 第25-26页 |
| ·HMGB蛋白 | 第26-29页 |
| 6 本研究的目的和内容 | 第29-30页 |
| 第二章 材料和方法 | 第30-63页 |
| 1 试验使用的菌株、质粒、试剂和培养基等材料 | 第30-33页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒载体 | 第30页 |
| ·文库 | 第30页 |
| ·植物 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-33页 |
| 2 稻瘟病菌产孢培养、孢子收集和附着胞诱导培养 | 第33-34页 |
| 3 E.coli DH5a感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 4 感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 5 X-gal和IPTG直接用于琼脂平板 | 第35-36页 |
| 6 CTAB法抽提质粒 | 第36-37页 |
| 7 CTAB法提取稻瘟病菌基因组DNA | 第37-38页 |
| 8 DNA的琼脂糖电泳 | 第38-39页 |
| 9 质粒酶切与连接 | 第39-41页 |
| ·pEGFP质粒的单酶切(双酶切) | 第39页 |
| ·双酶切酒精沉淀 | 第39-40页 |
| ·酶切片段的去磷酸化(CIP)处理 | 第40-41页 |
| ·DNA片段的连接反应体系 | 第41页 |
| 10 DNA片段的胶回收 | 第41页 |
| 11 小量质粒DNA的提取 | 第41-42页 |
| 12 中量质粒DNA的提取 | 第42-43页 |
| 13 RNA提取和分析 | 第43-44页 |
| 14 基因表达的Real Time PCR检测 | 第44-46页 |
| ·反转录反应 | 第44-45页 |
| ·Real Time PCR反应 | 第45-46页 |
| 15 DNA片段的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·长片段DNA的LD PCR扩增 | 第46页 |
| ·普通DNA片段的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 16 PCR产物的克隆 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的琼脂糖电泳及胶回收。 | 第47页 |
| ·PCR产物的连接。 | 第47-48页 |
| 17 DNA序列测序 | 第48页 |
| 18 DNA和蛋白序列分析 | 第48页 |
| 19 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第48-49页 |
| 20 稻瘟病菌原生质体转化和转化子验证 | 第49-50页 |
| 21 稻瘟病菌基因组DNA Southern杂交(DIG法) | 第50-56页 |
| ·探针的准备 | 第50-52页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的消化及电泳 | 第52-56页 |
| 22 免疫显色 | 第56-57页 |
| 23 稻瘟病菌的表型观察 | 第57-62页 |
| ·生长速率的测定 | 第57页 |
| ·在营养缺陷型、高渗及含重金属培养基上的生长情况分析 | 第57页 |
| ·产孢量的测定 | 第57页 |
| ·孢子大小的测定 | 第57页 |
| ·孢子萌发率的测定 | 第57-58页 |
| ·孢子的附着胞形成率 | 第58页 |
| ·附着胞大小的测定 | 第58页 |
| ·附着胞膨压的测定 | 第58页 |
| ·产孢菌丝的疏水性分析 | 第58-59页 |
| ·细胞壁完整性分析 | 第59页 |
| ·菌丝、孢子和附着胞超微结构的观察 | 第59-60页 |
| ·附着胞对叶片表皮穿透率的测定 | 第60-61页 |
| ·对植物离体叶片致病性的点接种测定 | 第61页 |
| ·对植物致病性的喷雾测定 | 第61-62页 |
| 24 稻瘟病菌基因的原核表达载体的构建和蛋白的原核表达 | 第62页 |
| 25 数据的统计分析 | 第62-63页 |
| 第三章 稻瘟病菌非组蛋白6基因的克隆和功能分析 | 第63-97页 |
| 1 稻瘟病菌非组蛋白6基因的克隆 | 第63-70页 |
| ·mnh6基因的克隆 | 第63-66页 |
| ·MNH6蛋白的功能预测 | 第66-68页 |
| ·MNH6蛋白的分布 | 第68-70页 |
| 2 非组蛋白6在细胞内作用位点的定位 | 第70-73页 |
| ·MNH6-GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第70-73页 |
| 3 稻瘟病菌mnh6基因的敲除 | 第73-78页 |
| ·稻瘟病菌基囚敲除载体的构建策略 | 第73-75页 |
| ·mnh6基因敲除载体的构建 | 第75-76页 |
| ·mnh6基因敲除载体的原生质体转化 | 第76-77页 |
| ·稻瘟病菌mnh6敲除转化子的筛选 | 第77-78页 |
| 4 基因缺失突变子△mnh6的基因互补恢复 | 第78-80页 |
| ·n mh6互补载体的构建 | 第78-79页 |
| ·mnh6互补载体的原生质体转化 | 第79页 |
| ·mnh6互补转化子的Southern杂交验证 | 第79-80页 |
| 5 突变子△mnh6和s121hb1的mnh6基因表达的qRT-PCR验证 | 第80-82页 |
| 6 突变子△mnh6的生长、产孢分析 | 第82-86页 |
| ·CM培养基上的生长分析 | 第82-83页 |
| ·CM培养基上的产孢分析 | 第83-84页 |
| ·孢子大小分析 | 第84-85页 |
| ·菌丝、孢子的超微结构分析 | 第85-86页 |
| 7 突变子△mnh6的孢子萌发、附着胞形成分析 | 第86-88页 |
| ·孢子萌发率分析 | 第86页 |
| ·附着胞形成率分析 | 第86-88页 |
| 8 突变子△mnh6的细胞壁完整性分析 | 第88-90页 |
| ·对细胞壁降解酶的敏感性 | 第88-89页 |
| ·疏水性和溶剂疏水性分析 | 第89-90页 |
| 9 突变子△mnh6的表皮穿透率分析 | 第90页 |
| 10 突变子△mnh6对大麦离体时片的致病性分析 | 第90-91页 |
| 11 突变子△mnh6的对大麦和水稻植株的致病性分析 | 第91-94页 |
| ·大麦 | 第91-92页 |
| ·水稻CO39 | 第92-94页 |
| 12讨论 | 第94-97页 |
| ·稻瘟病菌非组蛋白6(MNH6)的结构分析和功能预测 | 第94-95页 |
| ·mnh6在稻瘟病菌生长和发育过程中的作用 | 第95页 |
| ·mnh6在稻瘟病菌致病过程中的作用 | 第95-96页 |
| ·mnh6基因与MPS1细胞完整性MAPK途径的关系 | 第96-97页 |
| 第四章 稻瘟病菌Ⅲ型膜整合蛋白基因的克隆和功能分析 | 第97-116页 |
| 1 稻瘟病菌Ⅲ型膜整合蛋白mtp1基因的克隆 | 第97-106页 |
| 2 MTP1蛋白在稻瘟病菌发育过程中的表达研究 | 第106-107页 |
| 3 稻瘟病菌mtp1基因的敲除 | 第107-110页 |
| 4 突变子△mtp1的表型分析 | 第110-114页 |
| 5 讨论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-131页 |
