| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| ·HEPCIDIN的分子结构、基因表达与调控 | 第10-12页 |
| ·正常铁代谢 | 第12-13页 |
| ·铁代谢调节 | 第13-15页 |
| ·HEPCIDIN在铁代谢调节中的作用 | 第15-16页 |
| ·HEPCIDIN相关疾病 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母PICHIA PASTORIS表达体系 | 第17-24页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第18-19页 |
| ·宿主菌株 | 第19-20页 |
| ·外源基因的转化 | 第20-21页 |
| ·分泌蛋白的糖化特征 | 第21-22页 |
| ·外源蛋白表达优化 | 第22-24页 |
| ·有关的实验技术 | 第24-31页 |
| ·PCR引物设计 | 第24-27页 |
| ·质粒的提取与纯化 | 第27-28页 |
| ·DNA的凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·常用的肽类分析技术 | 第29-31页 |
| 第二章 PPIC9K-HEPCIDIN表达载体的构建 | 第31-44页 |
| ·DNA序列的设计与合成 | 第31页 |
| ·重组质粒载体PPIC9K-HEPCIDIN的构建 | 第31-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 重组表达载体PPIC9K-HEPCIDIN转染毕赤酵母宿主菌KM71 | 第44-49页 |
| ·制备KM71感受态 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44页 |
| ·重组子PPIC9K-HEPCIDIN质粒DNA线性化 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45页 |
| ·电转化毕赤酵母 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·重组子(HIS~+)的体内初筛(筛选GENETICIN~(?)抗性菌株) | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·复筛 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验操作 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-48页 |
| 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 毕赤酵母重组菌株的诱导表达和分析 | 第49-58页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·诱导表达 | 第49-50页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第50页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第50-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-57页 |
| 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 重组蛋白体外抑菌活性检验 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·培养基及其他 | 第58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-61页 |
| ·抑菌活性检验结果 | 第59-61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 附录1 毕赤酵母密码子的偏好性 | 第67-69页 |
| 附录2 各种培养基和储液的配制方法 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73-75页 |
