| 摘要 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8-13页 |
| 1 番茄 ToTOM3 基因的克隆和序列分析 | 第13-36页 |
| ·材料与方法 | 第14-23页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·酶、试剂盒和化学试剂 | 第14页 |
| ·培养基和常用溶液的配制 | 第14页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第14-23页 |
| ·番茄总RNA 的提取纯化 | 第14-15页 |
| ·番茄总DNA 的提取 | 第15-16页 |
| ·3′RACE | 第16页 |
| ·5′RACE | 第16-17页 |
| ·PCR 反应 | 第17页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第17页 |
| ·DNA 片段的纯化 | 第17-18页 |
| ·载体的脱磷酸化处理 | 第18页 |
| ·突出DNA 片段末端的补平 | 第18页 |
| ·DNA 限制性内切酶反应 | 第18-19页 |
| ·DNA连接反应 | 第19页 |
| ·DNA的转化 | 第19-20页 |
| ·质粒的提取 | 第20-21页 |
| ·Southern 杂交 | 第21-22页 |
| ·菌落原位杂交 | 第22页 |
| ·相对定量RT-PCR | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-34页 |
| ·ToTOM3基因全长cDNA的克隆 | 第23-27页 |
| ·ToTOM3 基因3′端序列的克隆 | 第23-24页 |
| ·ToTOM3 基因5′端序列的克隆 | 第24-25页 |
| ·ToTOM3 基因全长cDNA 的序列 | 第25-27页 |
| ·ToTOM3 基因编码蛋白质的氨基酸序列分析 | 第27-30页 |
| ·ToTOM3 基因编码蛋白质的疏水区域和跨膜结构区域 | 第27-28页 |
| ·ToTOM3 基因的同源性分析 | 第28-30页 |
| ·ToTOM3 全长基因的克隆 | 第30-33页 |
| ·ToTOM3 全长基因5′端片段的获得 | 第30-32页 |
| ·ToTOM3 全长基因3′端片段的获得 | 第32-33页 |
| ·ToTOM3 基因的结构 | 第33-34页 |
| ·ToTOM3 基因的内含子和外显子 | 第33页 |
| ·ToTOM3 基因的启动子序列 | 第33-34页 |
| ·ToTOM3 基因的时空表达 | 第34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 2 ToTOM3 基因的功能鉴定 | 第36-66页 |
| ·材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第38页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第38-40页 |
| ·三亲结合法向农杆菌导入目的质粒 | 第38-39页 |
| ·无菌苗的获得 | 第39页 |
| ·Flamingo-Bill外植体的转化 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的扩繁 | 第40页 |
| ·盆栽 | 第40页 |
| ·转基因番茄的分子生物学检测 | 第40-42页 |
| ·PCR 检测 | 第40-41页 |
| ·Southern 杂交检测 | 第41-42页 |
| ·转基因番茄的抗病鉴定 | 第42-43页 |
| ·磨檫接种法 | 第42页 |
| ·病毒相对含量的测定 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-64页 |
| ·反义RNA 表达质粒的构建 | 第43-46页 |
| ·反义RNA 表达质粒的构建策略 | 第43-44页 |
| ·番茄 ToTOM3 全长转录区的 PCR 克隆 | 第44-45页 |
| ·ToTOM3 基因反义 RNA 表达质粒 | 第45-46页 |
| ·RNAi表达质粒的构建 | 第46-51页 |
| ·RNAi 表达质粒pBIToT3R-A 的构建 | 第47-49页 |
| ·RNAi 表达质粒pBIToT3R-B 的构建 | 第49-51页 |
| ·将表达质粒导入农杆菌 EHA105 | 第51页 |
| ·转 ToTOM3 基因反义 RNA 和 RNAi 表达质粒的转基因番茄 | 第51-55页 |
| ·转基因番茄的分子生物学检测 | 第55-58页 |
| ·转基因番茄的 PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·转基因番茄的 Southern 杂交分析 | 第56-58页 |
| ·转基因番茄对 TMV 和 CMV 的抗性 | 第58-64页 |
| ·症状表现 | 第58-60页 |
| ·转基因番茄内TMV 的相对含量 | 第60-62页 |
| ·转基因番茄内CMV的相对含量 | 第62-64页 |
| ·转基因番茄中ToTOM3基因转录水平与抗病性之间的关系 | 第64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 3. 讨论 | 第66-71页 |
| ·ToTOM3 基因 | 第66页 |
| ·保守的TOM 基因家族 | 第66-67页 |
| ·寄主因子—抗病毒基因工程中全新的标靶基因 | 第67-69页 |
| ·转基因番茄的抗病机制 | 第69页 |
| ·ToTOM3 在亚细胞结构上的定位 | 第69-71页 |
| ·ToTOM3 的在CMV 复制中的相对活性 | 第71页 |
| 4. 结论 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-94页 |
| 英文摘要 | 第94-96页 |
| 附录 A 文献综述 正链 RNA 病毒与寄主植物的相互作用 | 第96-116页 |
| 附录 B ToTOM3 基因全长序列及其启动子序列 | 第116-121页 |
| 附录 C 常用培养基和溶液 | 第121-122页 |
| 附录 D 缩略词和英汉对照 | 第122-123页 |
