| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-19页 |
| 1． 微生物抗性机制 | 第7-14页 |
| 1．1 细胞表面吸附 | 第7-12页 |
| 1．1．1 微生物吸着 | 第8-11页 |
| 1．1．1．1 藻类生物吸附剂 | 第8-9页 |
| 1．1．1．2 真菌生物吸附剂 | 第9-10页 |
| 1．1．1．3 细菌生物吸附剂 | 第10-11页 |
| 1．1．2 微生物累积 | 第11-12页 |
| 1．2 重金属的转化作用 | 第12-13页 |
| 1．3 输出系统对重金属的作用 | 第13-14页 |
| 1．4 金属硫化物和金属磷化物 | 第14页 |
| 2． 与重金属代谢有关的运输蛋白家族 | 第14-17页 |
| 2．1 ABC-运输子 | 第14-15页 |
| 2．2 P-type ATPase | 第15-16页 |
| 2．3 A-type ATPase | 第16页 |
| 2．4 RND运输子 | 第16页 |
| 2．5 HoxN-家族 | 第16-17页 |
| 2．6 CDF家族 | 第17页 |
| 2．7 MIT家族 | 第17页 |
| 3． 抗重金属基因的功能分析 | 第17-18页 |
| 4． 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 材料和方法 | 第19-33页 |
| 1． 供试材料 | 第19-24页 |
| 1．1 供试菌株 | 第19页 |
| 1．2 供试质粒 | 第19页 |
| 1．3 培养基 | 第19-22页 |
| 1．4 试剂 | 第22-24页 |
| 1．5 供试抗生素 | 第24页 |
| 1．6 试剂盒和酶 | 第24页 |
| 2． 实验方法 | 第24-33页 |
| 2．1 NTG-01菌体的培养 | 第24页 |
| 2．2 NTG-01菌体的形态学和生理生化鉴定 | 第24-25页 |
| 2．3 NTG-01 16SrDNA的序列测定 | 第25-28页 |
| 2．3．1 NTG-01总DNA的抽提 | 第25页 |
| 2．3．2 16SrDNA片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2．3．3 纯化回收凝胶上16SrDNA片段的PCR扩增产物 | 第26-27页 |
| 2．3．4 制备大肠杆菌DH5α的感受态细胞 | 第27页 |
| 2．3．5 DNA片段的连接 | 第27页 |
| 2．3．6 酶连产物转化大肠杆菌DH5α | 第27页 |
| 2．3．7 酶连产物的质粒抽提 | 第27-28页 |
| 2．3．8 酶连产物验证和测序 | 第28页 |
| 2．4 NTG-01系统发育分析 | 第28页 |
| 2．5 NTG-01对多种重金属MIC的测定 | 第28-29页 |
| 2．6 NTG-01 BAC文库的构建 | 第29-33页 |
| 2．6．1 DNA样品的制备-包埋法 | 第29页 |
| 2．6．2 总DNA的部分酶切 | 第29-30页 |
| 2．6．3 脉冲场电泳 | 第30页 |
| 2．6．4 透析袋法回收NTG-01部分酶切的DNA片断 | 第30页 |
| 2．6．5 BAC载体的纯化处理 | 第30-31页 |
| 2．6．6 BAC载体和40kb左右外源DNA的连接 | 第31页 |
| 2．6．7 电转化感受态细胞DH10B的制备 | 第31-32页 |
| 2．6．8 酶连产物的电转化 | 第32页 |
| 2．6．9 阳性转化子的验证 | 第32-33页 |
| 结果与分析 | 第33-43页 |
| 1． NTG-01菌体的形态学和生理生化鉴定 | 第33-35页 |
| 1．1 革兰氏染色、形态结果 | 第33-34页 |
| 1．2 生理生化鉴定结果 | 第34-35页 |
| 2． 16S rDNA序列的PCR扩增和序列分析 | 第35-37页 |
| 3． 系统发育分析 | 第37-38页 |
| 4． 重金属最低抑菌浓度(MICs)的测定 | 第38-39页 |
| 5． NTG-01的BAC基因组文库的构建 | 第39-43页 |
| 5．1 包埋法制备 DNA样品 | 第39-40页 |
| 5．2 pBeloBAC11载体的酶切和纯化处理 | 第40-41页 |
| 5．3 阳性转化子的验证 | 第41-43页 |
| 小结与讨论 | 第43-46页 |
| 1． 小结 | 第43页 |
| 2． 讨论 | 第43-45页 |
| 2．1 外源 DNA的制备 | 第43-44页 |
| 2．2 BAC载体的处理和制备 | 第44页 |
| 2．3 BAC载体和外源DNA片段的连接和电转化 | 第44-45页 |
| 3． 展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
