| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-29页 |
| ·布鲁氏菌的研究进展 | 第16-24页 |
| ·布鲁氏菌病的危害 | 第16页 |
| ·布鲁氏菌病的病原特点 | 第16-17页 |
| ·布鲁氏菌的感染过程及机制 | 第17页 |
| ·影响布鲁氏菌胞内生存的因素 | 第17-24页 |
| ·细菌体内表达基因的鉴定 | 第24-29页 |
| ·体内表达技术（in vivo induced technology,IVET） | 第24-25页 |
| ·差异荧光诱导（differential fluorescence induction,DFI） | 第25-26页 |
| ·信号标签突变技术（signature-tagged mutagenesis） | 第26-27页 |
| ·体内诱生抗原鉴定技术（in vivo induced antigen technology,IVIAT） | 第27-29页 |
| 第二章 运用IVIAT技术鉴定布鲁氏菌体内感染因子——布鲁氏菌基因组表达文库的构建及鉴定 | 第29-39页 |
| ·材料和方法 | 第29-33页 |
| ·菌株及载体 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要缓冲液及试剂配制 | 第29-30页 |
| ·布鲁氏菌基因组的提取 | 第30页 |
| ·布鲁氏菌部分酶切条件的优化 | 第30-31页 |
| ·酶切片段的回收 | 第31页 |
| ·表达载体质粒的提取，线性化以及去磷酸化处理 | 第31-32页 |
| ·布鲁氏菌基因组DNA与表达载体的连接以及连接产物的回收 | 第32页 |
| ·电转化感受态的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·表达文库插入效率的鉴定 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·布鲁氏菌基因组提取纯度及完整性 | 第33-34页 |
| ·布鲁氏菌基因组的部分酶切 | 第34页 |
| ·pET28a,b,c表达质粒的提取，酶切及去磷酸化 | 第34-36页 |
| ·布鲁氏菌基因组表达文库的构建及其库容量分析 | 第36-37页 |
| ·布鲁氏菌表达文库插入效率的鉴定 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 IVIAT技术筛选布鲁氏菌的体内感染因子——布鲁氏菌表达文库的免疫筛选 | 第39-48页 |
| ·材料与方法 | 第39-43页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要缓冲液的配制 | 第39页 |
| ·血清的吸附 | 第39-41页 |
| ·用间接ELISA检测吸附过程中抗体效价的变化 | 第41页 |
| ·免疫筛选 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·血清与体外表达抗原吸附效果 | 第43页 |
| ·免疫筛选结果 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 部分布鲁氏菌体内诱导基因的克隆、表达及血清反应性检测 | 第48-57页 |
| ·材料和方法 | 第48-52页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第48页 |
| ·部分蛋白的克隆及原核表达 | 第48-50页 |
| ·重组蛋白的Westernblot检测 | 第50页 |
| ·免疫荧光方法对IVI基因的验证 | 第50-52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·IVI基因的PCR扩增及其与重组表达载体的鉴定 | 第52页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的Westernblot分析 | 第53-54页 |
| ·WB检测各重组蛋白的血清反应性 | 第54页 |
| ·IVI基因的免疫荧光验证 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 布鲁氏菌外膜蛋白D15的生物学活性分析及单克隆抗体制备 | 第57-64页 |
| ·材料和方法 | 第57-61页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·牛型布鲁氏菌A19全菌蛋白，膜蛋白、分泌蛋白的提取 | 第57页 |
| ·D15的亚定位 | 第57-58页 |
| ·His-D15与纤连蛋白（Fibronectin,FL）和纤连蛋白溶酶原（Plasminogen,PL）的结合活性试验 | 第58页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第58-60页 |
| ·间接ELISA和WB方法检测单抗 | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-63页 |
| ·布鲁氏菌膜蛋白的提取及D15的膜定位 | 第61页 |
| ·重组蛋白D15的FL,PL活性分析 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体D15的WB验证 | 第62-63页 |
| 5. 3 讨 论 | 第63-64页 |
| 第六章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72页 |
