中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
名词缩写 | 第6-7页 |
第一部分 文献综述 | 第7-22页 |
一、 钙信号转导及CAS的研究进展 | 第7-15页 |
1 细胞内Ca~(2+)的分布 | 第7-8页 |
2 细胞内Ca~(2+)水平的变化及调节—钙通道 | 第8-12页 |
3 钙离子的作用及信号转导机制 | 第12-14页 |
4 钙信号的研究方法 | 第14-15页 |
二、 胞外钙受体的研究进展 | 第15-18页 |
1 动物中胞外钙受体研究进展 | 第16-17页 |
2 植物中胞外钙受体的研究进展 | 第17-18页 |
三、 反义RNA技术原理及应用 | 第18-20页 |
1 反义RNA的作用机理 | 第18-19页 |
2 反义RNA的优点及应用 | 第19-20页 |
3 问题与展望 | 第20页 |
四、 本论文的立题依据和目标 | 第20-22页 |
第二部分 材料和方法 | 第22-39页 |
一、 实验材料 | 第22页 |
1 植物材料 | 第22页 |
2 菌株和质粒 | 第22页 |
3 质粒载体 | 第22页 |
4 引物、测序 | 第22页 |
二、 实验试剂 | 第22-24页 |
1 酶及部分试剂 | 第22页 |
2 培养基 | 第22-23页 |
3 所用的抗生素(储存浓度) | 第23页 |
4 缓冲液 | 第23-24页 |
5 常用的溶液 | 第24页 |
三、 实验方法 | 第24-39页 |
1 水稻CAS基因的RT-PCR扩增 | 第24-27页 |
2 重组质粒载体(pGEM-CAS)的构建(流程见图1) | 第27-29页 |
3 CAS基因测序及功能分析 | 第29页 |
4 水稻溶液培养及Northern杂交 | 第29-34页 |
5 反义载体PBI—CAS的构建及水稻初转化 | 第34-36页 |
6 载体pcDNA-CAS的构建 | 第36-39页 |
第三部分 实验结果和讨论 | 第39-53页 |
一、 CAS基因的RT-PCR扩增 | 第39页 |
1 CAS Gene cDNA引物设计及合成 | 第39页 |
2 提取水稻总RNA,逆转录及PCR扩增 | 第39页 |
二、 CAS基因及蛋白的序列分析 | 第39-46页 |
1 重组载体pGEM-CAS的构建与鉴定 | 第39-41页 |
2 CAS基因及蛋白结构及与功能分析 | 第41-46页 |
三、 CAS在不同钙离子胁迫条件下的表达 | 第46-48页 |
1 水稻的消毒及初培 | 第47页 |
2 Northern bloting分析 | 第47-48页 |
四、 PBI121-CAS反义载体的构建与水稻愈伤的转化 | 第48-49页 |
五、 pcDNA-CAS载体的构建 | 第49页 |
六、 讨论 | 第49-53页 |
第四部分 小结与展望 | 第53-54页 |
一、 小结 | 第53页 |
二、 展望 | 第53-54页 |
第五部分 参考文献 | 第54-59页 |
读硕期间发表论文情况 | 第59-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
附录:CAS序列 | 第61-63页 |