| 缩写与中英文对照 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-34页 |
| ·β-内酰胺酶及其抑制剂的研究 | 第12-22页 |
| ·β-内酰胺酶的简介 | 第12-13页 |
| ·β-内酰胺酶的结构 | 第13-15页 |
| ·β-内酰胺酶的构效关系 | 第15-17页 |
| ·β-内酰胺酶抑制剂的发现 | 第17-18页 |
| ·β-内酰胺酶抑制剂研究与发展 | 第18-22页 |
| 1 .2酵母双杂交系统的研究 | 第22-28页 |
| ·双杂交系统的原理 | 第22-24页 |
| ·酵母双杂交系统的研究进展 | 第24-25页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第25页 |
| ·三杂交系统 | 第25-27页 |
| ·反式双杂交系统 | 第27页 |
| ·SOS恢复系统 | 第27-28页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第28-32页 |
| ·寻找与靶蛋白相互作用的新的蛋白质 | 第28-29页 |
| ·寻找及确定在蛋白—蛋白相互作用中起关键作用地结构域 | 第29-30页 |
| ·寻找具有药物治疗作用的小分子多肽 | 第30页 |
| ·寻找与调控蛋白相互作用的化合物 | 第30-31页 |
| ·利用酵母双杂交系统建立蛋白相互作用图谱 | 第31-32页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第32-34页 |
| ·立题意义 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 TEM-1型β-内酰胺酶基因的克隆、表达及酶的纯化 | 第34-51页 |
| ·材料 | 第34-39页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第35-37页 |
| ·主要生化试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38-39页 |
| ·试验方法 | 第39-42页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·CaCl_2法将质粒转化大肠杆菌 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌质粒的分离 | 第40页 |
| ·DNA片断的回收 | 第40-41页 |
| ·pYG201/E.coli DH5α的培养及蛋白表达 | 第41页 |
| ·蛋白质的检测方法 | 第41-42页 |
| ·酶活性的测定方法 | 第42页 |
| ·试验结果 | 第42-49页 |
| ·β-内酰胺酶高效表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·β-内酰胺酶的表达 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白包含体的复性与纯化 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的活性检测 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第三章 随机寡核苷酸文库的构建及质粒转化酵母的研究 | 第51-66页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第53-54页 |
| ·主要生化试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器和设备 | 第54页 |
| ·试验方法 | 第54-56页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第54页 |
| ·大肠杆菌感受态的制作、大肠杆菌质粒的分离、转化及DNA片断的回收 | 第54页 |
| ·随机核苷酸库的扩增及其猎物质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·酵母菌质粒的转化 | 第55-56页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第56页 |
| ·试验结果 | 第56-64页 |
| ·PCR扩增单链随机寡核苷酸的引物设计 | 第56-57页 |
| ·用PCR扩增的方法获得随机寡核苷酸双链 | 第57-58页 |
| ·随机寡核苷酸文库的构建 | 第58-60页 |
| ·酵母表型的验证 | 第60页 |
| ·质粒DNA转化酵母的条件优化 | 第60-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第四章 酵母双杂交系统筛选β-内酰胺酶结合肽 | 第66-80页 |
| ·材料 | 第67-69页 |
| ·菌株和质粒 | 第67-68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第68-69页 |
| ·主要生化试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器和设备 | 第69页 |
| ·试验方法 | 第69-71页 |
| ·DNA片段的回收、连接、及大肠杆菌质粒的提取和转化 | 第69页 |
| ·随机核酸库的扩增及其猎物质粒的构建 | 第69页 |
| ·将外源DNA转化酵母 | 第69页 |
| ·GAL1-HIS3 背景表达的消除 | 第69-70页 |
| ·酵母双杂交筛选及复筛 | 第70页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第70页 |
| ·定量测定β-半乳糖苷酶的活性 | 第70-71页 |
| ·从酵母阳性转化子中分离质粒，对其进行PCR鉴定及测序 | 第71页 |
| ·试验结果 | 第71-77页 |
| ·酵母双杂交的对照试验 | 第71-72页 |
| ·最适3-AT浓度的确定 | 第72页 |
| ·酵母双杂交的筛选 | 第72-73页 |
| ·阳性转化子的复筛 | 第73-74页 |
| ·定量测定三株阳性菌株的β-半乳糖苷酶活性 | 第74-75页 |
| ·酶切和PCR法鉴定从酵母阳性菌株中分离pYG202-p1、-p2、和-p3 | 第75-76页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 第五章 β-内酰胺酶抑制短肽的表达、纯化与抑制作用测定 | 第80-93页 |
| ·材料 | 第80-83页 |
| ·菌株和质粒 | 第80-81页 |
| ·培养基 | 第81-82页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第82-83页 |
| ·主要生化试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器和设备 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-85页 |
| ·DNA片段的回收、连接、及大肠杆菌质粒的提取和转化 | 第83页 |
| ·重组菌的培养及融合蛋白的表达 | 第83-84页 |
| ·用Sepharose 4B亲和层析介质分离纯化GST融合蛋白 | 第84页 |
| ·小分子多肽的SDS-PAGE分析方法 | 第84-85页 |
| ·蛋白含量测定 | 第85页 |
| ·凝血酶消化GST-短肽融合蛋白 | 第85页 |
| ·肽抑制β-内酰胺酶活性的测定 | 第85页 |
| ·试验结果 | 第85-91页 |
| ·β-内酰胺酶结合肽-GST融合蛋白载体的构建 | 第85-87页 |
| ·重组GST融合蛋白的表达 | 第87-88页 |
| ·重组GST-短肽融合蛋白的纯化 | 第88-89页 |
| ·从融合蛋白中切割短肽 | 第89-90页 |
| ·体外检测短肽P1和P3对TEM-1型β-内酰胺酶的抑制作用 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 综述报告和发表文章 | 第104-105页 |
| 附录 | 第105-108页 |
