| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| 1 引言 | 第16页 |
| 2 AIDS疫苗研究概况 | 第16-23页 |
| ·AIDS疫苗发展过程中所面临的挑战 | 第16-17页 |
| ·HIV／AIDS疫苗研究的依据 | 第17-18页 |
| ·HIV-1疫苗保护作用相关的免疫应答 | 第18-19页 |
| ·体液免疫应答 | 第18-19页 |
| ·细胞介导免疫应答 | 第19页 |
| ·现有HIV／AIDS疫苗研究策略 | 第19-21页 |
| ·灭活疫苗和减毒活疫苗 | 第19-20页 |
| ·重组亚单位疫苗 | 第20页 |
| ·HIV病毒样颗粒 | 第20页 |
| ·活载体疫苗 | 第20-21页 |
| ·DNA疫苗 | 第21页 |
| ·联合免疫思路 | 第21页 |
| ·候选HIV／AIDS疫苗的临床评价 | 第21-22页 |
| ·未来HIV／AIDS疫苗设计新思路与展望 | 第22-23页 |
| 3 HIV-1基因组成及其与抗原选择的关系 | 第23-24页 |
| 4 痘苗病毒载体应肝疫苗研究概况 | 第24-25页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 能删除标记基因的痘苗病毒表达载体PVI75的构建 | 第26-39页 |
| 引言 | 第26-27页 |
| 1 材料和方法 | 第27-34页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·质粒和菌株 | 第27页 |
| ·工具酶和主要生化试剂 | 第27页 |
| ·试剂盒 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·常用溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·质粒pJSD-neo的构建 | 第29-31页 |
| ·质粒pIRES-neo的XholI和SmaI酶切消化和Klenow酶补平 | 第29页 |
| ·酶切、补平后产物的回收 | 第29页 |
| ·载体pJSD的酶切、补平和去磷酸化和回收 | 第29页 |
| ·neo-polyA基因片段与载体pJSD的连接 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·大肠杆菌转化子的检测 | 第30-31页 |
| ·质粒的小量提取 | 第30-31页 |
| ·转化子的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·pH6-neo和lacZ基因末端lacZ，片段的克隆和测序 | 第31-34页 |
| ·pH6-neo-polyA片段的扩增 | 第31页 |
| ·lacZ’基因片段的扩增 | 第31页 |
| ·lacZ’-pH6-neo-polyA基因片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·回收产物的TA克隆 | 第32-34页 |
| ·回收产物的加尾 | 第32页 |
| ·加尾产物克隆到pGEM-T Easy Vector上 | 第32页 |
| ·将连接产物转化感受态细胞 | 第32-34页 |
| ·neo基因的测序 | 第34页 |
| ·痘苗病毒转移载体PVI75的构建 | 第34页 |
| ·质粒构建流程 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-36页 |
| ·质粒pJSD-neo的构建 | 第34页 |
| ·pH6-neo和lacZ基因末端lacZ，片段的扩增、连接和测序 | 第34-36页 |
| ·pH6-neo-polyA片段和lacZ基因末端lacZ，片段的扩增 | 第34页 |
| ·lacZ’-pH6-neo-polyA基因片段的扩增 | 第34-36页 |
| ·lacZ’-pH6-neo-polyA基因片段的序列测定 | 第36页 |
| ·痘苗病毒转移载体PVI75的构建 | 第36页 |
| 3 分析与讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 表达HIV-1合成基因gagpolnef的重组痘苗病毒疫苗株的构建 | 第39-56页 |
| 引言 | 第39-41页 |
| 1 材料和方法 | 第41-50页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·工具酶和主要生化试剂 | 第41页 |
| ·试剂盒 | 第41页 |
| ·质粒、载体和菌株 | 第41页 |
| ·鉴定引物 | 第41页 |
| ·细胞与毒株 | 第41页 |
| ·抗体及其它 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·常用溶液的配制 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-50页 |
| ·表达载体pVI75-syngpnef的构建 | 第42-43页 |
| ·重组痘苗病毒的构建 | 第43-44页 |
| ·质粒DNA溶液的制备 | 第43页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制作 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44页 |
| ·重组痘苗病毒的筛选 | 第44-45页 |
| ·根据噬斑颜色不同的蓝白噬斑筛选法 | 第44-45页 |
| ·抗体染色法筛选 | 第45页 |
| ·重组痘苗病毒的鉴定 | 第45-49页 |
| ·PCR法鉴定 | 第45-47页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第45-46页 |
| ·PCR法鉴定重组痘苗病毒中目的基因syngpnef的存在 | 第46页 |
| ·PCR法鉴定重组痘苗病毒中标记基因lacZ和neo的删除 | 第46-47页 |
| ·Dot blot法鉴定 | 第47-49页 |
| ·模板制备 | 第47页 |
| ·探针标记 | 第47页 |
| ·探针定量 | 第47-48页 |
| ·核酸的固定和杂交 | 第48-49页 |
| ·Western Blot检测重组痘苗病毒中目的基因gag的表达 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白的收获 | 第49页 |
| ·蛋白印迹法检测表达产物 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-54页 |
| ·转移质粒pVI75-syngpnef的构建 | 第50页 |
| ·重组痘苗病毒的构建 | 第50页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第50-51页 |
| ·蓝斑筛选 | 第50-51页 |
| ·白斑筛选 | 第51页 |
| ·抗体染色法筛选 | 第51页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第51-54页 |
| ·PCR法鉴定重组病毒 | 第51页 |
| ·PCR法鉴定重组痘苗病毒中目的基因syngpnef的存在 | 第51页 |
| ·PCR法鉴定重组痘苗病毒中标记基因neo的删除 | 第51页 |
| ·Dot blot法鉴定 | 第51-54页 |
| ·Dot blot法鉴定重组病毒中目的基因syngpnef的存在 | 第51-54页 |
| ·Dot blotting法鉴定重组病毒中标记基因neo的删除 | 第54页 |
| ·Western Bloting检测重组病毒中目的基因的表达 | 第54页 |
| 3 分析和讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录1: 拟进入临床试验的疫苗 | 第65-66页 |
| 附录2: 已列入计划或正在进行的临床试验 | 第66-68页 |
| 附录3: 合成基因syngpnef序列 | 第68-70页 |
| 附录4: neo基因测序图 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
