| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 本文所用缩略语 | 第8-9页 |
| 第一部分 利用DNA改组技术体外定向进化大肠杆菌β-半乳糖苷酶的研究 | 第9-35页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 酶体外定向分子进化 | 第9-10页 |
| 2 DNA改组技术 | 第10-15页 |
| ·DNA改组技术路线的建立和发展 | 第10-12页 |
| ·DNA改组技术的改进 | 第12页 |
| ·DNA改组技术的创新性和应用 | 第12-15页 |
| 3 β-半乳糖苷酶在基因工程中的应用 | 第15页 |
| 4 改组β-半乳糖苷酶基因的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 研究报告 | 第16-33页 |
| 1 材料与方法 | 第16-20页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·质粒、菌株、试剂、试剂盒与常用培养基 | 第16页 |
| ·寡核苷酸引物合成及PCR扩增反应 | 第16-17页 |
| ·DNA Shuffling程序 | 第17页 |
| ·PCR扩增LacZ基因及产物回收 | 第17页 |
| ·降解DNA及回收小片段 | 第17页 |
| ·Primerless PCR | 第17页 |
| ·Primer PCR | 第17页 |
| ·突变体文库的构建和筛选 | 第17页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第17页 |
| ·细菌高效表达载体 | 第17-19页 |
| ·β-半乳糖苷酶的表达载体构建 | 第19页 |
| ·β-半乳糖苷酶的分离和纯化 | 第19页 |
| ·β-半乳糖苷酶的酶活力测定 | 第19-20页 |
| 2 试验结果 | 第20-32页 |
| ·LacZ基因的shuffling重排 | 第20页 |
| ·突变体库的构建、筛选以及酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·野生型和突变型LacZ基因的表达、纯化 | 第21-23页 |
| ·野生型和突变型LacZ基因核苷酸和氨基酸序列的比较 | 第23-31页 |
| ·野生型和突变型β-半乳糖苷酶的酶活力分析 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-35页 |
| 第二部分 根癌农杆菌介导DREBlA基因转化八棱海棠的研究 | 第35-59页 |
| 第一章 文献综述 | 第35-45页 |
| 1 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第35-41页 |
| ·根癌农杆菌 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒 | 第36页 |
| ·根癌农杆菌介导的基因转移机制 | 第36-37页 |
| ·农杆菌介导的基因转移方法 | 第37-40页 |
| ·共培养法 | 第37页 |
| ·用分离的Ti质粒直接转化原生质体共培养法 | 第37-40页 |
| ·农杆菌介导的基因转移基本过程和步骤 | 第40-41页 |
| 2 根癌农杆菌介导苹果转基因的现状 | 第41-43页 |
| ·苹果遗传转化的主要进展 | 第41-42页 |
| ·影响苹果转基因效率的因素 | 第42-43页 |
| ·影响苹果叶片高效再生的因素 | 第42页 |
| ·影响农杆菌介导遗传转化的因素 | 第42-43页 |
| ·农杆菌菌株 | 第42页 |
| ·菌液浓度及外植体在菌液中的浸染时间 | 第42页 |
| ·共培养 | 第42-43页 |
| ·酚类物质活化Vir区 | 第43页 |
| ·抗生素及转化植株选择策略 | 第43页 |
| 3 拟南芥胁迫调控蛋白基因DreBlA的研究 | 第43-44页 |
| 4 拟南芥胁迫调控蛋白基因DreBlA在苹果转化中的应用及展望 | 第44-45页 |
| 第二章 研究报告 | 第45-53页 |
| 1 试验材料与方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·质粒和菌株 | 第45页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第45页 |
| ·主要培养基与溶液 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·基因克隆技术 | 第46页 |
| ·DREBlA基因的克隆 | 第46页 |
| ·双元载体的构建 | 第46-47页 |
| ·苹果砧木八棱海棠的遗传转化 | 第47页 |
| ·农杆菌的活化 | 第47页 |
| ·外植体的准备 | 第47页 |
| ·农杆菌侵染外植体 | 第47页 |
| ·暗共培养 | 第47页 |
| ·不定芽的再生及其抗性筛选 | 第47页 |
| ·检测 | 第47-48页 |
| ·GUS组织化学法染色 | 第47页 |
| ·PCR扩增检测 | 第47页 |
| ·Southern blot杂交检测 | 第47-48页 |
| 2 试验结果与分析 | 第48-51页 |
| ·拟南芥胁迫调控蛋白基因的克隆 | 第48-50页 |
| ·转基因双元载体的构建 | 第50-51页 |
| ·遗传转化与再生 | 第51页 |
| ·抗性苗的分子检测 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| ·DREBlA基因克隆 | 第51页 |
| ·双元载体pDreBlA的获得 | 第51-52页 |
| ·影响遗传转化的因素 | 第52-53页 |
| 图版 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
