| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 综述第一节: WSSV研究进展 | 第14-26页 |
| 1 WSSV的危害及历史 | 第15页 |
| 2 白斑病的症状 | 第15-16页 |
| 3 患病对虾组织病理学变化 | 第16页 |
| 4 WSSV的宿主范围、传播途径 | 第16-17页 |
| 5 WSSV形态特征 | 第17-18页 |
| 6 WSSV结构、功能及基因组学研究概况 | 第18-21页 |
| ·WSSV基因组 | 第18-19页 |
| ·WSSV结构蛋白研究 | 第19-20页 |
| ·WSSV非结构蛋白研究 | 第20-21页 |
| ·WSSV分类地位及地理株间的差异 | 第21页 |
| 7 基因组学研究的一些方法 | 第21-26页 |
| ·从蛋白到基因途径 | 第22页 |
| ·从基因到蛋白途径 | 第22页 |
| ·蛋白相互作用的研究 | 第22-26页 |
| 综述第二节: 噬菌体表面展示应用于分子识别研究 | 第26-40页 |
| 1 噬菌体展示载体的主要类型 | 第28-29页 |
| ·噬菌体载体 | 第28-29页 |
| ·噬菌体质粒载体 | 第29页 |
| 2 噬菌体展示载体的构建 | 第29-32页 |
| ·随机肽库的构建 | 第29-30页 |
| ·cDNA展示文库的构 | 第30-31页 |
| ·片段展示库 | 第31-32页 |
| ·随机突变库 | 第32页 |
| 3 噬菌体文库的筛选 | 第32-34页 |
| 4 噬菌体表面展示具体应用举例 | 第34-40页 |
| ·噬菌体表面展示技术与抗体库相结合构建噬菌体抗体库 | 第34页 |
| ·蛋白功能域的定位 | 第34页 |
| ·酶或受体抑制剂的筛选 | 第34页 |
| ·基因表达调控方面的应用 | 第34页 |
| ·在基因治疗方面的应用 | 第34-40页 |
| 第一章 病毒多克隆抗体的制备及与虾细胞膜特异性结合关系的确立 | 第40-61页 |
| 第一节 病毒的纯化及标记 | 第41-48页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·病毒纯化 | 第41-42页 |
| ·病毒蛋白定量 | 第42页 |
| ·病毒的地高辛标记 | 第42页 |
| ·标记效果验证 | 第42-43页 |
| ·病毒蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳分析 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·病毒的纯化 | 第44-45页 |
| ·病毒蛋白的定量 | 第45-46页 |
| ·病毒的标记结果验证 | 第46页 |
| ·病毒的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第二节 病毒多克隆抗体的制备 | 第48-52页 |
| 1 材料方法 | 第48-49页 |
| ·免疫程序 | 第48页 |
| ·抗血清的获得 | 第48页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第48-49页 |
| ·抗血清的吸收 | 第49页 |
| ·抗血清Westernblot分析 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-51页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第50页 |
| ·抗血清的Westernblot分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第三节 虾细胞膜的提取及虾细胞膜与病毒特异性结合关系的确立 | 第52-61页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·病毒纯化 | 第52页 |
| ·病毒蛋白定量 | 第52页 |
| ·病毒的地高辛标记及标记效果验证 | 第52页 |
| ·虾组织匀浆液蛋白酶活性的测定 | 第52页 |
| ·虾细胞膜的提取 | 第52-53页 |
| ·病毒与虾细胞膜的结合实验 | 第53页 |
| ·未标记病毒竞争结合标记病毒 | 第53-54页 |
| ·虾细胞膜变性条件下与病毒的结合 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-59页 |
| ·实验用虾 | 第54-55页 |
| ·病毒纯化与标记 | 第55页 |
| ·虾细胞匀浆液蛋白酶活性的测定 | 第55-56页 |
| ·虾细胞膜蛋白浓度的测定 | 第56页 |
| ·虾细胞膜的提取 | 第56-57页 |
| ·标记病毒与虾细胞膜的结合实验 | 第57页 |
| ·未标记病毒与标记病毒竞争结合对虾鳃细胞膜 | 第57-58页 |
| ·虾鳃细胞膜变新条件下与病毒的结合 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第二章 VP28、VP281的噬菌体表面展示 | 第61-87页 |
| 第一节 VP28，VP281引物设计及PCR扩增 | 第62-71页 |
| 1 材料和方法 | 第62-65页 |
| ·引物的设计 | 第62-63页 |
| ·PCR扩增 | 第63-65页 |
| ·PCR产物回收 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-68页 |
| ·引物设计 | 第65-66页 |
| ·PCR产物分析 | 第66-68页 |
| ·PCR产物回收后定量 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 第二节 VP28、VP281的噬菌体表面展示 | 第71-80页 |
| 1 材料和方法 | 第71-76页 |
| ·PCR产物的限制性内切酶消化 | 第71页 |
| ·PCR酶切消化产物的纯化 | 第71-72页 |
| ·酶切产物的定量 | 第72页 |
| ·酶切产物与噬菌体展示载体的连接 | 第72-73页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第73页 |
| ·电转导 | 第73-74页 |
| ·重组噬菌体克隆的增殖 | 第74页 |
| ·重组插入片段检测 | 第74-76页 |
| ·重组噬菌体表达E-tag的筛选 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-79页 |
| ·酶切产物的定量 | 第76-77页 |
| ·连接子的转导 | 第77页 |
| ·重组子插入片断筛选 | 第77-78页 |
| ·重组噬菌体表达E-tag的筛选 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-80页 |
| 第三节 VP28，VP281重组噬菌体与虾鳃细胞的结合试验 | 第80-84页 |
| 1 材料与方法 | 第80-81页 |
| ·由插入片段及E-tag抗体检测为阳性的克隆进行扩大规模的增殖 | 第80页 |
| ·重组噬菌体pfu的测定 | 第80-81页 |
| ·阳性克隆表达E-tag的检测及WSSV多克隆抗体的检测 | 第81页 |
| ·重组噬菌体与虾细胞膜的结合试验 | 第81页 |
| 2 结果 | 第81-83页 |
| ·阳性克隆的扩大增殖及E-tag、WSSV多抗检测 | 第81-82页 |
| ·VP28，VP281重组噬菌体与虾鳃细胞膜的结合试验 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-84页 |
| 本章常用试剂一览表 | 第84-87页 |
| 第三章 WSSV几种可能编码囊膜蛋白的ORF的噬菌体表面展示 | 第87-104页 |
| 第一节 用于噬菌体展示的ORF的筛选及引物设计 | 第88-91页 |
| 1 材料与方法 | 第88页 |
| ·ORF的筛选 | 第88页 |
| ·各ORF引物的设计 | 第88页 |
| 2 结果 | 第88-90页 |
| ·ORF的筛选 | 第88-90页 |
| ·各ORF的引物设计 | 第90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 第二节 各ORF的噬菌体表面展示 | 第91-98页 |
| 1 材料与方法 | 第91-94页 |
| ·目的ORF的PCR扩增 | 第91-92页 |
| ·PCR产物的限制性酶消化、与载体的连接 | 第92-94页 |
| ·连接子的转导 | 第94页 |
| ·转导子的筛选 | 第94页 |
| 2 结果 | 第94-97页 |
| ·目的ORF的PCR扩增 | 第94-95页 |
| ·PCR产物的限制性酶切消化、定量 | 第95-96页 |
| ·重组子质粒提取筛选 | 第96页 |
| ·重组噬菌体表达E-tag的筛选 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 第三节 展示的ORF与虾鳃细胞膜的结合实验 | 第98-104页 |
| 1 材料与方法 | 第98-99页 |
| ·阴性克隆的大量增殖 | 第98页 |
| ·阳性克隆表达E-tag的检测 | 第98页 |
| ·重组噬菌体与虾鳃细胞膜的结合的筛选 | 第98页 |
| ·虾鳃细胞膜结合阳性克隆与虾鳃细胞膜的结合实验 | 第98页 |
| ·重组噬菌体与WSSV-DIG竞争结合虾鳃细胞膜 | 第98-99页 |
| ·WSSV竞争结合重组噬菌体与虾鳃细胞膜的结合 | 第99页 |
| 2 结果 | 第99-102页 |
| ·阳性克隆增值后E-tag表达的检测 | 第99-100页 |
| ·重组噬菌体与虾鳃细胞膜的结合的筛选 | 第100页 |
| ·虾鳃细胞膜结合阳性克隆与虾鳃细胞膜的结合实验 | 第100-101页 |
| ·重组噬菌体与WSSV-DIG竞争结合虾鳃细胞膜 | 第101-102页 |
| ·WSSV竞争结合重组噬菌体与虾鳃细胞膜的结合 | 第102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| 第四章 ORF的非融合表达 | 第104-121页 |
| 第一节 重组噬菌体感染非融合表达宿主HB2151 | 第105-107页 |
| 1 材料与方法 | 第105-106页 |
| ·对数期HB2151的准备 | 第105页 |
| ·重组噬菌体感染HB2151 | 第105页 |
| ·重组子筛选 | 第105页 |
| ·克隆的大量增殖及诱导表达 | 第105-106页 |
| 2 结果 | 第106页 |
| 3 讨论 | 第106-107页 |
| 第二节 非融合蛋白westerblot分析 | 第107-113页 |
| 1 材料与方法 | 第107-108页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第107页 |
| ·SDS-PAGE后电转印 | 第107-108页 |
| ·免疫检测 | 第108页 |
| 2 结果 | 第108-112页 |
| ·非融合表达蛋白的SDS-PAGE | 第108-109页 |
| ·病毒多抗对表达蛋白的检测 | 第109-111页 |
| ·Anti-E-tag抗体对表达蛋白进行Westernblot分析 | 第111-112页 |
| 3 讨论 | 第112-113页 |
| 第三节 ORF1#序列分析 | 第113-121页 |
| 1 材料与方法 | 第113页 |
| ·基因片段分析 | 第113页 |
| ·蛋白序列分析 | 第113页 |
| 2 结果 | 第113-118页 |
| ·基因片段分析 | 第113-114页 |
| ·ORF1#蛋白序列分析 | 第114-118页 |
| 3 讨论 | 第118-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
