中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
缩写词一览表 | 第6-7页 |
第一部分 fdr3功能的进一步研究 | 第7-33页 |
导言 | 第7-12页 |
材料与试剂 | 第12-14页 |
方法 | 第14-19页 |
一. fdr3重组质粒融合蛋白的诱导及western blotting | 第14-15页 |
1. 诱导重组体的融合蛋白的表达 | 第14页 |
2. 融合蛋白的SDS-PAGE | 第14页 |
3. 银染 | 第14页 |
4. 考染 | 第14页 |
5. 大肠杆菌粗提物的制备及对抗血清的处理 | 第14-15页 |
6. 转膜和杂交 | 第15页 |
二. 玉米可溶性蛋白的western blotting | 第15-16页 |
1. 缺铁胁迫玉米的栽培 | 第15-16页 |
2. 可溶性蛋白的提取 | 第16页 |
3. SDS-PAGE | 第16页 |
4. 可溶性蛋白的western blotting | 第16页 |
三. 原fdr3 ORF的鉴定及其部分片段的获得 | 第16-17页 |
1. 原fdr3重组质粒的双酶切 | 第16页 |
2. 双酶切产物的回收 | 第16-17页 |
四. fdr3中ORF的Southern blotting检测 | 第17-18页 |
1. 植物组织基因组DNA的提取 | 第17页 |
2. 转膜 | 第17页 |
3. 预杂交 | 第17页 |
4. 探针的制备 | 第17-18页 |
5. 杂交 | 第18页 |
6. 洗膜及放射自显影 | 第18页 |
五. fdr3基因的扩增 | 第18-19页 |
1. 引物的设计 | 第18页 |
2. 引物的合成 | 第18页 |
3. PCR | 第18-19页 |
结果与分析 | 第19-26页 |
讨论 | 第26-28页 |
展望 | 第28-29页 |
结论 | 第29-30页 |
参考文献 | 第30-33页 |
第二部分 TaNRT1的进一步克隆 | 第33-54页 |
导言 | 第33-37页 |
材料与试剂 | 第37-38页 |
方法 | 第38-42页 |
一. pBluescript质粒载体与AF片段(前RT-PCR产物)重组体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
1. 载体与外源片段的连接 | 第38页 |
2. DH5α感受态细菌的制备 | 第38页 |
3. 重组质粒的转化与蓝白筛选 | 第38-39页 |
4. 质粒的提取 | 第39页 |
5. 重组质粒的双酶切 | 第39页 |
6. 重组质粒的测序 | 第39页 |
二. pGEX-1,pGEX-2T,pGEX-3X质粒表达载体与AF片段重组体的构建及鉴定 | 第39-41页 |
1. 质粒表达载体进行双酶切 | 第39-40页 |
2. pBluescript-T-TaNRT1重组体进行双酶切 | 第40页 |
3. 双酶切产物的回收 | 第40页 |
4. 质粒表达载体与外源片段的连接 | 第40页 |
5. JM109感受态细菌的制备 | 第40页 |
6. 重组质粒的转化 | 第40-41页 |
7. 质粒的提取 | 第41页 |
8. 重组质粒的单酶切 | 第41页 |
9. 测序 | 第41页 |
三. 融合蛋白的诱导及SDS-PAGE | 第41-42页 |
1. 融合蛋白的诱导表达 | 第41页 |
2. 融合蛋白的SDS-PAGE | 第41页 |
3. 考染 | 第41-42页 |
结果与分析 | 第42-47页 |
讨论 | 第47-48页 |
展望 | 第48-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-52页 |
致谢 | 第52-54页 |