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RNA结合蛋白QKI在造血系统髓系分化中的表达调控及其功能研究

缩略语表第1-11页
中文摘要第11-15页
英文摘要第15-19页
前言第19-21页
文献回顾第21-42页
正文第42-92页
 第一部分 RNA结合蛋白QKI在髓系单核/巨噬细胞分化中的表达调控及其功能研究第42-71页
  引言第42-43页
  实验一 QKI在单核/巨噬细胞分化中的表达变化第43-52页
   1 材料、试剂与仪器第43-45页
   ·实验材料第43页
   ·主要试剂第43-44页
   ·主要仪器第44-45页
   2 方法第45-49页
   ·细胞培养第45页
   ·RT-PCR第45-47页
   ·免疫印迹第47-49页
   3 结果第49-51页
   ·HL-60 细胞向单核/巨噬细胞分化过程中QKI表达降低第49-50页
   ·THP-1 细胞向单核/巨噬细胞分化过程中QKI表达降低第50-51页
   4 讨论第51-52页
  实验二 QKI在单核/巨噬细胞分化中的转录调控机制第52-59页
   1 材料、试剂与仪器第52页
   2 方法第52-55页
   ·QKI上游调控区的分析和转录因子的预测第52页
   ·免疫印迹法检测转录因子在单核第52页
   ·利用荧光报告系统检测转录因子C/EBPα对QKI启动子的调控第52-53页
   ·采用ChIP实验在体内验证C/EBPα与QKI启动子的结合第53-55页
   3 结果第55-58页
   ·qki基因启动子区含有保守的C/EBPα结合位点第55-56页
   ·在单核/巨噬细胞分化过程中C/EBPα与QKI表达均降低第56页
   ·启动子荧光报告系统检测发现C/EBPα上调QKI启动子第56-57页
   ·ChIP 实验证实 C/EBPα直接调控 QKI 启动子第57-58页
   4 讨论第58-59页
  实验三 QKI在单核/巨噬细胞分化中的功能研究第59-69页
   1 材料、试剂与仪器第59页
   2 方法第59-64页
   ·寻找在单核/巨噬细胞分化过程中出现明显变化的分子第59页
   ·改变内源QKI表达水平后检测相关分子的变化第59-61页
     ·降低内源QKI的表达后检测相关分子的变化第59-60页
     ·过表达QKI后检测相关分子的变化第60-61页
   ·不同种属间QKI的同源性分析第61页
   ·报告基因载体的构建和检测第61-62页
   ·RNA免疫共沉淀(RNA-IP)第62-64页
   3 结果第64-67页
   ·在单核/巨噬细胞分化中,CSF1R 的表达变化与 QKI 相反第64页
   ·CSF1R的表达与QKI表达呈负相关第64-66页
   ·QKI直接结合于CSF1R3’UTR序列降低其表达第66-67页
   4 讨论第67-69页
  小结第69-71页
 第二部分 RNA结合蛋白QKI在髓系粒细胞分化中的表达调控及其功能研究第71-86页
  引言第71-72页
  实验一 QKI在粒细胞分化中的表达变化第72-80页
   1 材料、试剂与仪器第72-73页
   ·实验材料第72页
   ·主要试剂第72-73页
   ·主要仪器第73页
   2 方法第73-74页
   ·粒细胞诱导分化模型的建立及QKI表达水平的检测第73-74页
   ·瑞士-吉姆萨染色第74页
   ·细胞周期的检测第74页
   ·RT-PCR第74页
   ·免疫印迹第74页
   3 结果第74-80页
   ·ATRA诱导粒细胞不完全分化过程中QKI表达无明显变化第74-76页
   ·ARTA 诱导粒细胞完全分化过程中 QKI 表达降低第76-78页
   ·DMSO诱导粒细胞快速完全分化过程中QKI表达明显降低第78-80页
   4 讨论第80页
  实验二 QKI在粒细胞分化中的转录调控机制及其功能研究第80-85页
   1 材料、试剂与仪器第80页
   2 方法第80-81页
   3 结果第81-82页
   ·在粒细胞分化过程中 QKI 的表达随着 C/EBPα表达的变化而变化第81页
   ·在HL-60 细胞中降低QKI的表达后加速ATRA诱导的粒细胞分化第81-82页
   4 讨论第82-85页
  小结第85-86页
 第三部分 慢病毒的制备第86-92页
  引言第86页
  1 材料、试剂与仪器第86-87页
   ·实验材料第86-87页
   ·主要试剂第87页
   ·主要仪器第87页
  2 方法第87-88页
   ·载体构建第87-88页
   ·细胞培养第88页
   ·病毒包装第88页
   ·病毒感染效率检测第88页
  3 结果第88-90页
   ·病毒载体的构建第88-89页
   ·慢病毒感染不同细胞的效率第89-90页
  4 讨论第90-92页
总结第92-94页
参考文献第94-107页
个人简历和研究成果第107-108页
致谢第108-109页

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