缩略语表 | 第1-11页 |
中文摘要 | 第11-15页 |
英文摘要 | 第15-19页 |
前言 | 第19-21页 |
文献回顾 | 第21-42页 |
正文 | 第42-92页 |
第一部分 RNA结合蛋白QKI在髓系单核/巨噬细胞分化中的表达调控及其功能研究 | 第42-71页 |
引言 | 第42-43页 |
实验一 QKI在单核/巨噬细胞分化中的表达变化 | 第43-52页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第43-45页 |
·实验材料 | 第43页 |
·主要试剂 | 第43-44页 |
·主要仪器 | 第44-45页 |
2 方法 | 第45-49页 |
·细胞培养 | 第45页 |
·RT-PCR | 第45-47页 |
·免疫印迹 | 第47-49页 |
3 结果 | 第49-51页 |
·HL-60 细胞向单核/巨噬细胞分化过程中QKI表达降低 | 第49-50页 |
·THP-1 细胞向单核/巨噬细胞分化过程中QKI表达降低 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-52页 |
实验二 QKI在单核/巨噬细胞分化中的转录调控机制 | 第52-59页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第52页 |
2 方法 | 第52-55页 |
·QKI上游调控区的分析和转录因子的预测 | 第52页 |
·免疫印迹法检测转录因子在单核 | 第52页 |
·利用荧光报告系统检测转录因子C/EBPα对QKI启动子的调控 | 第52-53页 |
·采用ChIP实验在体内验证C/EBPα与QKI启动子的结合 | 第53-55页 |
3 结果 | 第55-58页 |
·qki基因启动子区含有保守的C/EBPα结合位点 | 第55-56页 |
·在单核/巨噬细胞分化过程中C/EBPα与QKI表达均降低 | 第56页 |
·启动子荧光报告系统检测发现C/EBPα上调QKI启动子 | 第56-57页 |
·ChIP 实验证实 C/EBPα直接调控 QKI 启动子 | 第57-58页 |
4 讨论 | 第58-59页 |
实验三 QKI在单核/巨噬细胞分化中的功能研究 | 第59-69页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第59页 |
2 方法 | 第59-64页 |
·寻找在单核/巨噬细胞分化过程中出现明显变化的分子 | 第59页 |
·改变内源QKI表达水平后检测相关分子的变化 | 第59-61页 |
·降低内源QKI的表达后检测相关分子的变化 | 第59-60页 |
·过表达QKI后检测相关分子的变化 | 第60-61页 |
·不同种属间QKI的同源性分析 | 第61页 |
·报告基因载体的构建和检测 | 第61-62页 |
·RNA免疫共沉淀(RNA-IP) | 第62-64页 |
3 结果 | 第64-67页 |
·在单核/巨噬细胞分化中,CSF1R 的表达变化与 QKI 相反 | 第64页 |
·CSF1R的表达与QKI表达呈负相关 | 第64-66页 |
·QKI直接结合于CSF1R3’UTR序列降低其表达 | 第66-67页 |
4 讨论 | 第67-69页 |
小结 | 第69-71页 |
第二部分 RNA结合蛋白QKI在髓系粒细胞分化中的表达调控及其功能研究 | 第71-86页 |
引言 | 第71-72页 |
实验一 QKI在粒细胞分化中的表达变化 | 第72-80页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第72-73页 |
·实验材料 | 第72页 |
·主要试剂 | 第72-73页 |
·主要仪器 | 第73页 |
2 方法 | 第73-74页 |
·粒细胞诱导分化模型的建立及QKI表达水平的检测 | 第73-74页 |
·瑞士-吉姆萨染色 | 第74页 |
·细胞周期的检测 | 第74页 |
·RT-PCR | 第74页 |
·免疫印迹 | 第74页 |
3 结果 | 第74-80页 |
·ATRA诱导粒细胞不完全分化过程中QKI表达无明显变化 | 第74-76页 |
·ARTA 诱导粒细胞完全分化过程中 QKI 表达降低 | 第76-78页 |
·DMSO诱导粒细胞快速完全分化过程中QKI表达明显降低 | 第78-80页 |
4 讨论 | 第80页 |
实验二 QKI在粒细胞分化中的转录调控机制及其功能研究 | 第80-85页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第80页 |
2 方法 | 第80-81页 |
3 结果 | 第81-82页 |
·在粒细胞分化过程中 QKI 的表达随着 C/EBPα表达的变化而变化 | 第81页 |
·在HL-60 细胞中降低QKI的表达后加速ATRA诱导的粒细胞分化 | 第81-82页 |
4 讨论 | 第82-85页 |
小结 | 第85-86页 |
第三部分 慢病毒的制备 | 第86-92页 |
引言 | 第86页 |
1 材料、试剂与仪器 | 第86-87页 |
·实验材料 | 第86-87页 |
·主要试剂 | 第87页 |
·主要仪器 | 第87页 |
2 方法 | 第87-88页 |
·载体构建 | 第87-88页 |
·细胞培养 | 第88页 |
·病毒包装 | 第88页 |
·病毒感染效率检测 | 第88页 |
3 结果 | 第88-90页 |
·病毒载体的构建 | 第88-89页 |
·慢病毒感染不同细胞的效率 | 第89-90页 |
4 讨论 | 第90-92页 |
总结 | 第92-94页 |
参考文献 | 第94-107页 |
个人简历和研究成果 | 第107-108页 |
致谢 | 第108-109页 |