| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 1 国内外研究进展 | 第15-19页 |
| ·病原特性 | 第15-16页 |
| ·流行病学与临床症状 | 第16页 |
| ·DHV-I清抗体诊断方法现状 | 第16-19页 |
| ·中和试验 | 第17页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第17页 |
| ·血凝试验 | 第17页 |
| ·荧光抗体 | 第17-18页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第18页 |
| ·胶体金标记 | 第18页 |
| ·分子生物学 | 第18页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第18-19页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 材料和方法 | 第20-37页 |
| 1 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2 主要试剂 | 第20页 |
| 3 抗原、实验动物、样品 | 第20-21页 |
| 4 主要溶液及其配制 | 第21-22页 |
| 5 Ⅰ型鸭肝炎弱毒的增殖与纯化 | 第22-24页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的增殖 | 第22-23页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的纯化 | 第23-24页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的蔗糖密度梯度离心纯化 | 第23页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的氯仿差速超高速离心纯化 | 第23页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的超滤-差速超高速离心纯化 | 第23页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的差速超高速离心纯化 | 第23-24页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒纯度鉴定 | 第24页 |
| ·电镜观察 | 第24页 |
| ·将病毒液用核酸蛋白仪进行蛋白含量测定。 | 第24页 |
| 6 Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体阳性、阴性对照血清的制备 | 第24-27页 |
| ·动物准备及分组 | 第24页 |
| ·弱毒尿囊液处理 | 第24页 |
| ·强毒肝匀浆的制备 | 第24-25页 |
| ·免疫程序 | 第25页 |
| ·鸭抗DHV-I高免血清中和效价的测定 | 第25页 |
| ·鸭抗DHV-I血清的采集及保存 | 第25-26页 |
| ·阴性血清制备方法 | 第26页 |
| ·AGP检测阳性及阴性血清 | 第26-27页 |
| ·琼脂板的制备 | 第26页 |
| ·抗原的制备 | 第26页 |
| ·AGP最佳样品稀释度选择 | 第26-27页 |
| ·AGP检测自制阴性血清样本 | 第27页 |
| 7 间接ELISA方法的建立 | 第27-30页 |
| ·最佳工作浓度的确定及工作条件的优化 | 第27-29页 |
| ·最佳抗原包被浓度和最佳抗体工作浓度的确定 | 第27页 |
| ·最佳抗体工作浓度和最佳二抗浓度的确定 | 第27-28页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第28页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第28页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第28页 |
| ·最佳封闭条件的确定 | 第28页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第28-29页 |
| ·间接ELISA方法的评估 | 第29-30页 |
| ·临界值测定 | 第29页 |
| ·选择性试验 | 第29页 |
| ·符合性、敏感性试验 | 第29页 |
| ·检测域试验 | 第29-30页 |
| ·特异性试验 | 第30页 |
| ·稳定性试验 | 第30页 |
| ·重复性试验 | 第30页 |
| 8 Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测方法的建立 | 第30-34页 |
| ·乳胶前处理 | 第31页 |
| ·LAT最佳工作浓度的确定及工作条件的优化 | 第31-32页 |
| ·致敏方法 | 第31页 |
| ·最佳致敏病毒量的确定 | 第31-32页 |
| ·最佳致敏时间的选择 | 第32页 |
| ·最佳致敏温度的选择 | 第32页 |
| ·致敏加样方式的选择 | 第32页 |
| ·LAT方法的评估 | 第32-33页 |
| ·选择性试验 | 第32-33页 |
| ·符合性、敏感性试验 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·检测域试验 | 第33页 |
| ·LAT反应体系的确定 | 第33-34页 |
| ·LAT反应量的确定 | 第33页 |
| ·LAT反应步骤的确定 | 第33-34页 |
| 9 DHV-I抗体乳胶凝集检测试剂盒的组装 | 第34页 |
| ·乳胶凝集卡设计及前处理 | 第34页 |
| ·组分的确定 | 第34页 |
| ·试剂盒外包装的确定 | 第34页 |
| 10 DHV-I抗体乳胶凝集检测试剂盒的应用评估和质量控制 | 第34-37页 |
| ·LAT试剂盒批内重复性试验 | 第34页 |
| ·LAT试剂盒批间重复性试验 | 第34-35页 |
| ·高温对试剂盒的破坏作用(37℃下贮存3D) | 第35页 |
| ·试剂盒的保存期试验(4℃) | 第35页 |
| ·DHV-I抗体乳胶凝集检测试剂盒的盲样检测 | 第35页 |
| ·DHV-I抗体LAT与ELISA的初步应用的比较 | 第35页 |
| ·临床决定水平 | 第35-36页 |
| ·试剂盒的使用方法说明 | 第36-37页 |
| ·样品制备 | 第36页 |
| ·检测 | 第36页 |
| ·结果判定 | 第36-37页 |
| 结果与分析 | 第37-63页 |
| 1 Ⅰ型鸭肝炎弱毒的增殖与纯化结果 | 第37-38页 |
| 2 鸭抗DHV高免血清中和效价的测定结果 | 第38-40页 |
| ·测病毒LD_(50): | 第38-39页 |
| ·中和指数测定: | 第39-40页 |
| 3 AGP检测阳性及阴性血清结果 | 第40-41页 |
| ·AGP最佳血清稀释度试验结果 | 第40页 |
| ·AGP样本检测结果 | 第40-41页 |
| 4 间接ELISA方法的建立 | 第41-49页 |
| ·最佳工作浓度的确定及工作条件的优化结果 | 第41-43页 |
| ·最佳抗原包被浓度和最佳抗体工作浓度的确定 | 第41页 |
| ·最佳抗体工作浓度和最佳二抗浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第42页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第42-43页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第43页 |
| ·最佳封闭条件的选择 | 第43页 |
| ·最佳显色时间的选择 | 第43页 |
| ·间接ELISA方法的评估 | 第43-49页 |
| ·临界值的确定 | 第43-44页 |
| ·选择性试验 | 第44页 |
| ·符合性、敏感性试验 | 第44-45页 |
| ·检测域试验 | 第45页 |
| ·特异性试验 | 第45-46页 |
| ·稳定性试验 | 第46-48页 |
| ·重复性试验 | 第48-49页 |
| 5 DHV-I抗体乳胶凝集检测方法的建立 | 第49-54页 |
| ·LAT最佳工作浓度的确定及工作条件的优化结果 | 第49-51页 |
| ·最佳致敏病毒量的确定 | 第49-50页 |
| ·最佳致敏时间的选择 | 第50页 |
| ·最佳致敏温度的选择 | 第50-51页 |
| ·致敏加样方式的选择 | 第51页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测方法的评估 | 第51-53页 |
| ·选择性试验 | 第51-52页 |
| ·符合性、敏感性试验 | 第52-53页 |
| ·特异性试验 | 第53页 |
| ·检测域试验 | 第53页 |
| ·反应体系试验 | 第53-54页 |
| ·反应量的确定 | 第53页 |
| ·反应步骤的确定 | 第53-54页 |
| 6 Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测剂盒的组装 | 第54-56页 |
| ·乳胶凝集卡设计及前处理 | 第54-55页 |
| ·试剂盒组分的确定 | 第55-56页 |
| ·试剂盒外包装: | 第56页 |
| 7 DHV-I抗体乳胶凝集检测试剂盒的评诂与质量控制 | 第56-63页 |
| ·LAT试剂盒批内重复试验结果 | 第56-58页 |
| ·LAT试剂盒批间重复性试验 | 第58页 |
| ·高温对本发明试剂盒的破坏作用(37℃下贮存3D) | 第58-59页 |
| ·试剂盒的保存期试验(4℃) | 第59-60页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测试剂盒的盲样检测 | 第60页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒LAT与间接ELISA检测结果的比较 | 第60-61页 |
| ·临床决定水平的测定 | 第61-63页 |
| 讨论 | 第63-69页 |
| 1 关于DHV-I病毒纯化 | 第63-64页 |
| 2 关于所建立的间接ELISA | 第64-65页 |
| 3 关于LAT的致敏 | 第65-66页 |
| 4 关于乳胶试验载体的改进 | 第66页 |
| 5 关于LAT试剂盒与ELISA方法 | 第66-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
