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CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
1 前言第9-17页
   ·心肌梗死的背景第9页
   ·心肌梗塞与干细胞的疗法第9-14页
     ·胚胎干细胞第10页
     ·成体干细胞第10页
     ·造血干细胞第10-11页
     ·内皮祖细胞第11-12页
     ·多能成体祖细胞第12页
     ·骨骼肌成肌细胞第12页
     ·心肌祖细胞第12-13页
     ·间充质细胞第13-14页
   ·骨髓干细胞的归巢及SDF-1/CXCR4轴在归巢中的作用第14-16页
     ·干细胞的归巢第14页
     ·SDF-1/CXCR4轴在骨髓干细胞迁移和归巢的作用第14-15页
     ·SDF-1/CXCR4轴在心肌梗死治疗中的应用第15-16页
   ·本论文研究的主要内容、目的及意义第16-17页
     ·本论文研究的目的及意义第16页
     ·本论文研究的主要内容第16-17页
2 材料与方法第17-34页
   ·实验材料第17-20页
     ·实验动物第17页
     ·实验仪器第17页
     ·主要试剂第17-18页
     ·主要试剂的配制第18-20页
   ·实验方法第20-34页
     ·MSCs的培养与鉴定第20-22页
     ·CXCR4基因逆转录病毒表达载体的构建第22-28页
     ·CXCR4体外转染MSCs及转染后MSCs的表达检测第28-33页
     ·CXCR4/SDF-1轴的体外靶向性实验第33-34页
3 结果与讨论第34-62页
   ·MSCs的鉴定第34-37页
     ·形态特征第34-35页
     ·MSCs的免疫染色鉴定结果第35-36页
     ·MSCs的生长动力学检测第36页
     ·MSCs的冻存与复苏第36页
     ·本节讨论第36-37页
   ·CXCR4逆转录病毒质粒的构建第37-48页
     ·逆转录病毒一的目的基因片断CXCR4的酶切及回收第37-38页
     ·载体质粒pMSCV-IRES-GFP的补平反应及回收第38-39页
     ·pMSCV-GFP与CXCR4的连接及双酶切鉴定第39-40页
     ·重组质粒pMSCV-CXCR4-IRES-GFP的PCR鉴定第40页
     ·重组质粒pMSCV-CXCR4-IRES-GFP的CXCR4基因片段测序第40页
     ·逆转录病毒二的目的基因片断CXCR4的酶切及回收第40-41页
     ·中间载体质粒pBlue-script的补平反应及回收第41-42页
     ·pBlue-script与和hCXCR4的连接及双酶切鉴定第42页
     ·载体质粒pMSCV-neo~r的双酶切反应及回收第42-43页
     ·pMSCV-neo~r与CXCR4的连接及双酶切鉴定第43-44页
     ·重组质粒pMSCV-neo~r-CXCR4的PCR鉴定第44-45页
     ·重组质粒pMSCV-neo~r-CXCR4的CXCR4基因片段的测序第45页
     ·本节讨论第45-48页
   ·两种CXCR4基因质粒体外修饰MSCs及转导效率的比较第48-56页
     ·质粒的纯度及浓度检测第48页
     ·病毒的制备第48-49页
     ·逆转录病毒感染大鼠的MSCs并进行转导效率的比较第49-53页
     ·RT-PCR检测CXCR4基因修饰的MSCs表达第53页
     ·基因修饰的MSCs生长动力学检测第53-54页
     ·本节讨论第54-56页
   ·SDF-1对CXCR4的体外靶向作用第56-62页
     ·transwell细胞体外穿越试验第56-57页
     ·CXCR4阻断型抗体AMD3100对MSCs迁移的影响第57-58页
     ·无血清条件下SDF-1/CXCR4轴对MSCs凋亡的影响第58-60页
     ·本节讨论第60-62页
4 结论第62-63页
   ·结论第62页
   ·论文创新点第62-63页
5 展望第63-64页
6 参考文献第64-71页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第71-72页
8 致谢第72页

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