| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-24页 |
| 第一章 抗球虫药筛选方法的研究及寄生虫热激蛋白的研究进展 | 第11-24页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·抗球虫药筛选方法的研究 | 第12-18页 |
| ·体内筛选 | 第12-13页 |
| ·抗球虫药体内筛选程序及活性判定标准 | 第13-14页 |
| ·体外筛选 | 第14-15页 |
| ·细胞培养法筛选抗球虫剂程序 | 第15-16页 |
| ·鸡胚筛选抗球虫药程序 | 第16-17页 |
| ·总体评价 | 第17-18页 |
| ·寄生虫应激蛋白的研究进展 | 第18-24页 |
| ·热激蛋白的研究历史和分类 | 第18-19页 |
| ·寄生虫热激蛋白的研究进展 | 第19-24页 |
| 实验研究 | 第24-69页 |
| 第二章 鸡胚肠上皮细胞的原代培养方法的建立 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| ·主要仪器器材 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂成分及含量 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·细胞培养板处理 | 第26页 |
| ·肠上皮细胞的分离 | 第26页 |
| ·肠上皮细胞的消化 | 第26页 |
| ·细胞生长和增殖 | 第26-27页 |
| ·形态学观察及组织化学检查 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·不同消化酶的分离效果 | 第27-28页 |
| ·FCS 对鸡原代IEC 生长的影响 | 第28页 |
| ·培养温度、CO_2 浓度对鸡原代IEC 生长的影响 | 第28-29页 |
| ·不同培养基对IEC 的影响 | 第29页 |
| ·IEC 生长与形态 | 第29-30页 |
| ·碱性磷酸酶活性显色结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·消化酶的选择 | 第31页 |
| ·上皮细胞的纯化 | 第31页 |
| ·生长基质 | 第31-32页 |
| ·培养条件 | 第32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 鸡球虫体外培养模型的建立 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第33页 |
| ·实验所用虫株 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·卵囊分离纯化与保存 | 第34页 |
| ·制备球虫子孢子 | 第34-35页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫的体外培养 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·不同培养基对子孢子的影响 | 第35页 |
| ·培养基的pH | 第35页 |
| ·培养温度、CO_2 浓度 | 第35页 |
| ·子孢子在鸡胚肠上皮细胞上的生长发育 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 鸡柔嫩艾美耳球虫HSP70 基因的克隆 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·试验动物和饲料 | 第40页 |
| ·菌株、载体 | 第40页 |
| ·分子生物学试剂和试剂盒 | 第40页 |
| ·培养基及配制 | 第40-41页 |
| ·引物 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·CaCl_2 法转化用材料 | 第41页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·子孢子的纯化 | 第41页 |
| ·子孢子总RNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR 扩增E. tenella 基因 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 产物的回收纯化 | 第43页 |
| ·RT-PCR 产物与pGEM-T 的连接 | 第43-44页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α(CaCl_2 法) | 第44页 |
| ·转化克隆的PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·用E.Z.N.A 小量质粒制备试剂盒抽提PCR 阳性克隆的质粒 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的序列测定及分析 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-47页 |
| ·E.tenella 开放阅读框HSP70 的RT-PCR 扩增结果 | 第46页 |
| ·转化菌落的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·HSP70 基因ORF 的测序结果 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 鸡柔嫩艾美耳球虫HSP70 在大肠埃希菌中的表达及DNA 疫苗表达载体构建 | 第48-62页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·菌株、载体 | 第48页 |
| ·引物 | 第48页 |
| ·常用分子生物学试剂和试剂盒 | 第48-49页 |
| ·常规化学试剂 | 第49页 |
| ·CaCl_2 法转化所需材料 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE 所需材料 | 第49页 |
| ·免疫印迹所需材料 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白纯化所需材料 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·HSP70 基因片段的扩增 | 第50-51页 |
| ·载体的制备 | 第51页 |
| ·pET-32a(+)、pMAL-c2X、pcDNA-6 与HSP70 的连接 | 第51-52页 |
| ·用CaCl_2 法将连接产物转化入宿主细菌E.coli Rosetta(DE3)、E.coli JM109 | 第52页 |
| ·转化克隆的PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·PCR 阳性克隆的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·HSP70 在E.coli Rosetta(DE3)的诱导表达 | 第53页 |
| ·重组蛋白的大量表达和纯化 | 第53-55页 |
| ·蛋白质浓度与纯度的检测 | 第55页 |
| ·HSP70 在真核细胞的表达 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·HSP70 基因片段的扩增结果 | 第56页 |
| ·转化菌落的PCR 鉴定和质粒的酶切鉴定 | 第56-58页 |
| ·HSP70 重组大肠埃希菌的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·HSP70 在细胞内的表达 | 第59页 |
| ·HSP70 融合蛋白的亲和层析和Western blot 鉴定 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第六章 鸡柔嫩艾美耳球虫HSP70 融合蛋白的免疫原性和保护性实验 | 第62-69页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·所需仪器及材料 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63页 |
| ·重组柔嫩艾美耳球虫HSP70 免疫原性和保护性实验 | 第63-65页 |
| ·试验动物及分组 | 第63页 |
| ·试验设计 | 第63页 |
| ·ELISA 检测鸡血清中的抗体 | 第63-64页 |
| ·抗球虫效果的判定 | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65-67页 |
| ·重组柔嫩艾美耳球虫HSP70 生物活性测定 | 第65页 |
| ·免疫鸡血清效价的测定 | 第65-66页 |
| ·鸡只增重变化 | 第66页 |
| ·重组蛋白免疫对球虫感染的卵囊产量、盲肠病变的影响 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白免疫对球虫感染的综合保护效果 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录A 英汉缩写词表 | 第76-77页 |
| 附录B HSP70 测序结果 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 个人简介 | 第81页 |
