| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-30页 |
| ·棉花黄萎病的相关研究 | 第16-18页 |
| ·棉花黄萎病害 | 第16页 |
| ·棉花黄萎病的致病机理 | 第16-17页 |
| ·棉花对黄萎病的抗性机制 | 第17-18页 |
| ·抗棉花黄萎病基因的研究现状 | 第18页 |
| ·植物乙烯信号转导途径与植物抗病机制 | 第18-20页 |
| ·乙烯分子的合成及调控途径 | 第18-19页 |
| ·乙烯途径中的信号转导及乙烯信号在核内的转导 | 第19页 |
| ·乙烯诱导的抗性反应在植物与病原菌互作过程的作用 | 第19-20页 |
| ·植物转录因子的结构与功能 | 第20-26页 |
| ·植物转录因子的典型结构域 | 第20-21页 |
| ·植物转录因子在植物信号转导途径中的功能 | 第21-22页 |
| ·AP2/EREBP 类转录因子的基本结构与功能特性 | 第22页 |
| ·ERF 转录因子的结构特点 | 第22-23页 |
| ·ERF 参与乙烯等多种信号转导途径 | 第23-24页 |
| ·ERF 对在信号转导途径中对下游基因表达的调控 | 第24-25页 |
| ·植物中ERF 转录因子研究进展 | 第25页 |
| ·棉花中ERF 的研究及其对抗病、抗逆性状的改良作用 | 第25-26页 |
| ·病程相关蛋白（Pathogen-relative PR） | 第26-27页 |
| ·棉花转基因技术 | 第27-29页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第27-28页 |
| ·基因枪轰击转化法 | 第28页 |
| ·花粉管通道转化法 | 第28页 |
| ·棉花转基因应用进展 | 第28-29页 |
| ·研究的意义与实验内容 | 第29-30页 |
| ·研究意义 | 第29页 |
| ·实验内容 | 第29-30页 |
| 第二章 海岛棉ERF 转录因子基因cDNA 的获得与序列分析 | 第30-42页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·棉花材料 | 第30页 |
| ·菌种及载体 | 第30页 |
| ·酶与生化试剂 | 第30页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·PCR 引物 | 第30页 |
| ·序列测序 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·海岛棉材料的培养 | 第31页 |
| ·黄萎病菌胁迫处理 | 第31页 |
| ·总RNA 的提取 | 第31页 |
| ·CTAB 法提取植物基因组DNA | 第31-32页 |
| ·EREB1 和EREB2 基因的克隆 | 第32-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·提取纯化幼苗的总RNA | 第35页 |
| ·RT-PCR 克隆目的基因ERF 保守域片段 | 第35-36页 |
| ·利用3’-RACE 法扩增基因3’端片段 | 第36页 |
| ·利用5’-RACE 法扩增基因5’端片段 | 第36页 |
| ·EREB1 和EREB2 基因的cDNA 序列及相关生物学分析 | 第36-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 海岛棉EREB1/2 基因表达特性与基因拷贝数分析 | 第42-51页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·酶与生化试剂 | 第42页 |
| ·试剂盒 | 第42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·棉花幼苗的诱导及总RNA 提取 | 第42-43页 |
| ·反转录RNA 获得cDNA | 第43页 |
| ·RT-PCR 检测基因表达量 | 第43页 |
| ·CTAB 法提取基因组DNA | 第43页 |
| ·基因组DNA 的酶切反应 | 第43-44页 |
| ·Southern 杂交 | 第44-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·EREB1 和EREB2 基因的表达特性 | 第46-47页 |
| ·EREB1/2 的Southern blot 分析 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 海岛棉ERF 蛋白的体外表达与结合特性分析 | 第51-62页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·菌株和载体 | 第51页 |
| ·酶与生化试剂 | 第51页 |
| ·试剂盒 | 第51页 |
| ·引物和测序 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-56页 |
| ·转录因子EREB1 和EREB2 基因的原核表达 | 第51-54页 |
| ·pGEX4T-1/EREBs 表达的融合蛋白的获得与纯化 | 第54-55页 |
| ·凝胶阻滞（EMSA）实验 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·EREB1 和EREB2 读码框的蛋白表达 | 第56-58页 |
| ·EREB1 和EREB2 中ERF 域片段的蛋白诱导表达 | 第58-59页 |
| ·EREB1/ERF 和EREB2/ERF 蛋白的凝胶阻滞分析 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 EREB1 和EREB2 基因的烟草转化和功能分析 | 第62-77页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·菌株及载体 | 第62页 |
| ·酶与化学试剂 | 第62页 |
| ·试剂盒 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·引物合成 | 第62页 |
| ·相关序列的测序检测 | 第62-63页 |
| ·植物组织培养基 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-68页 |
| ·双子叶植物转基因表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第64-66页 |
| ·实时定量PCR 分析 | 第66-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-75页 |
| ·双子叶植物表达载体的构建与检测 | 第68页 |
| ·转化农杆菌及阳性菌株筛选 | 第68-69页 |
| ·转基因烟草植株的获得与分子检测 | 第69-71页 |
| ·转基因烟草中EREB1/2 超表达可增强PR 基因的表达 | 第71-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 转基因棉花植株的获得与功能分析 | 第77-90页 |
| ·材料 | 第77-79页 |
| ·受体棉花材料 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| ·试剂盒 | 第77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| ·菌株与植物表达载体 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77-79页 |
| ·方法 | 第79-83页 |
| ·农杆菌介导法转化棉花 | 第79页 |
| ·基因枪轰击法转化棉花 | 第79-80页 |
| ·花粉管通道法转化棉花 | 第80-81页 |
| ·表达载体质粒的提取与检测稀释 | 第81页 |
| ·棉花基因组DNA 的提取 | 第81页 |
| ·棉花总RNA 的提取 | 第81页 |
| ·PCR 检测 | 第81-82页 |
| ·RT-PCR 检测相关基因表达量 | 第82页 |
| ·黄萎病菌侵染转基因阳性棉花植株 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·农杆菌介导法转化棉花及抗性植株的获得 | 第83-84页 |
| ·基因枪转化棉花及抗性植株的获得 | 第84-85页 |
| ·花粉管通道法转化棉花及抗性植株的获得 | 第85-86页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第85-86页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第86-87页 |
| ·RT-PCR 检测超表达 ERF 基因对陆地棉中的抗病相关基因的调控能力 | 第87页 |
| ·转基因植株的总RNA 提取 | 第87页 |
| ·转基因植株中抗病相关基因表达增强 | 第87-88页 |
| ·转基因棉花植株抗病能力的初步鉴定 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 第七章 结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 附录 | 第103页 |
