| 提要 | 第1-5页 |
| 缩略语表 | 第5-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-54页 |
| ·脂肪酶简介 | 第10-13页 |
| ·脂肪酶简介 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第11页 |
| ·脂肪酶的催化机理 | 第11-13页 |
| ·枯草芽孢杆菌脂肪酶的研究进展 | 第13-26页 |
| ·枯草芽孢杆菌简介 | 第13-14页 |
| ·枯草芽孢杆菌脂肪水解酶的酶学性质和研究进展 | 第14-26页 |
| ·定向进化提高酶的立体选择性的研究进展 | 第26-40页 |
| ·突变方法的选择 | 第28-33页 |
| ·筛选方法的选择 | 第33-38页 |
| ·定向进化的应用 | 第38-40页 |
| ·本论文的设计思路与研究意义 | 第40-42页 |
| ·参考文献 | 第42-54页 |
| 第2章 枯草杆菌脂肪酶 LipA 的基因克隆与表达纯化 | 第54-71页 |
| 引言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-64页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·实验方法 | 第56-64页 |
| ·实验结果 | 第64-68页 |
| ·枯草杆菌基因组提取 | 第64页 |
| ·LipA 基因扩增结果 | 第64页 |
| ·LipA 基因双酶切鉴定 | 第64页 |
| ·LipA 基因测序结果 | 第64-65页 |
| ·LipA 的表达SDS-PAGE 电泳图 | 第65-66页 |
| ·LipA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及活力染色 | 第66-67页 |
| ·LipA 脂肪酶的纯化及活力测定 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69页 |
| ·参考文献 | 第69-71页 |
| 第3章 定点突变改变 LipA 的立体选择性及动力学研究 | 第71-90页 |
| 引言 | 第71页 |
| ·材料与方法 | 第71-78页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-78页 |
| ·实验结果 | 第78-85页 |
| ·全质粒PCR 电泳图 | 第78页 |
| ·质粒的限制性酶切鉴定 | 第78-79页 |
| ·LipA 与A75G 催化2-辛醇的转酯化反应 | 第79页 |
| ·LipA 与A75G 催化心得安中间体的转酯化反应 | 第79-80页 |
| ·LipA 与A75G 催化水解扁桃酸乙酯 | 第80-81页 |
| ·LipA 与A75G 催化水解对硝基苯酚辛酸酯 | 第81-82页 |
| ·温度对活力和立体选择性的影响 | 第82-83页 |
| ·pH 值对活力和立体选择性的影响 | 第83-84页 |
| ·不同溶剂对反应的影响 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·本章小结 | 第86-87页 |
| ·参考文献 | 第87-90页 |
| 第4章 定点饱和突变提高 LipA 的立体选择性研究 | 第90-104页 |
| 引言 | 第90页 |
| ·材料与方法 | 第90-95页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-95页 |
| ·实验结果 | 第95-100页 |
| ·N18 饱和突变库的筛选 | 第95-96页 |
| ·脂肪酶水解(R,S)-扁桃酸-(S)-2-辛酯的立体选择性比较 | 第96页 |
| ·水解单扁桃酸-(R,S)-2-辛酯的反应 | 第96-97页 |
| ·LipA 和各突变酶的活力 | 第97-98页 |
| ·最适温度 | 第98-99页 |
| ·酶的热稳定性研究 | 第99页 |
| ·最适pH 值 | 第99页 |
| ·pH 值稳定性 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-101页 |
| ·本章小结 | 第101页 |
| ·参考文献 | 第101-104页 |
| 第5章 定向进化提高枯草杆菌脂肪酶BSL2 的活力 | 第104-116页 |
| 引言 | 第104页 |
| ·材料与方法 | 第104-107页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·实验方法 | 第105-107页 |
| ·实验结果 | 第107-112页 |
| ·易错PCR 突变库的建立和筛选 | 第107页 |
| ·酶的最适温度和热稳定性 | 第107-109页 |
| ·酶的最适pH 值和pH 稳定性 | 第109页 |
| ·BSLA 与BSL2 的序列比对及晶体结构 | 第109-111页 |
| ·酶与底物的分子对接 | 第111-112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| ·本章小结 | 第114页 |
| ·参考文献 | 第114-116页 |
| 结论 | 第116-118页 |
| 攻读博士期间的研究成果 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 中文摘要 | 第121-125页 |
| ABSTRACT | 第125-129页 |
