| 内容提要 | 第1-10页 |
| 英文缩写 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-36页 |
| ·肝癌治疗的研究进展 | 第11-13页 |
| ·肿瘤基因治疗及其研究现状 | 第13-15页 |
| ·细胞凋亡与肿瘤 | 第15-25页 |
| ·细胞凋亡的形态和生化特征 | 第16-17页 |
| ·细胞凋亡的检测方法 | 第17-18页 |
| ·形态学方法 | 第17页 |
| ·生物化学方法 | 第17-18页 |
| ·细胞凋亡信号转导通路 | 第18-20页 |
| ·线粒体介导的凋亡途径 | 第18-19页 |
| ·死亡受体介导的凋亡途径 | 第19-20页 |
| ·细胞凋亡相关因子 | 第20-23页 |
| ·caspases家族 | 第20-22页 |
| ·细胞色素c | 第22-23页 |
| ·细胞凋亡在肿瘤发生、治疗中的作用 | 第23-25页 |
| ·细胞凋亡与肿瘤发生 | 第23-24页 |
| ·细胞凋亡与肿瘤治疗 | 第24-25页 |
| ·Smac/DIABLO和肿瘤 | 第25-30页 |
| ·Smac/DIABLO的生物学特征 | 第26-27页 |
| ·Smac/DIABLO的促凋亡作用 | 第27-28页 |
| ·Smac/DIABLO与肿瘤的关系 | 第28-30页 |
| ·顺铂与肿瘤 | 第30-33页 |
| ·顺铂的抗肿瘤作用 | 第30-32页 |
| ·顺铂与细胞凋亡 | 第32-33页 |
| ·镉与肿瘤 | 第33-36页 |
| ·镉的抗肿瘤作用 | 第33页 |
| ·镉与细胞凋亡 | 第33-36页 |
| 第2章 材料与方法 | 第36-55页 |
| ·主要试剂及器材 | 第36-39页 |
| ·试剂 | 第36-38页 |
| ·器材 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·质粒与菌株 | 第39页 |
| ·细胞株 | 第39-40页 |
| ·顺铂和氯化镉的配制 | 第40页 |
| ·细胞生物学实验方法 | 第40-43页 |
| ·培养液配制 | 第40页 |
| ·胎牛血清制备 | 第40页 |
| ·D-Hank’s液的配制 | 第40页 |
| ·胰酶的配制 | 第40页 |
| ·细胞培养 | 第40-41页 |
| ·细胞冻存 | 第41页 |
| ·细胞转染 | 第41页 |
| ·细胞毒性检测 | 第41-42页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第42-43页 |
| ·AO/EB双荧光法检测细胞凋亡 | 第42页 |
| ·FCM检测细胞凋亡 | 第42-43页 |
| ·免疫细胞化学法检测caspase-3、-9 和Cyt c蛋白的表达 | 第43页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第43-54页 |
| ·细菌培养技术 | 第43-47页 |
| ·细菌LB培养基的配制 | 第43-44页 |
| ·细菌复苏 | 第44页 |
| ·细菌培养 | 第44页 |
| ·细菌冻存 | 第44页 |
| ·感受态菌的制备（氯化钙法） | 第44-45页 |
| ·细菌转化 | 第45页 |
| ·质粒提取 | 第45-47页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第47-54页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第47-48页 |
| ·RNA的定量 | 第48页 |
| ·引物设计及合成 | 第48页 |
| ·RT-PCR法钓取人全长型Smac（FL hSmac）基因CDs序列 | 第48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·DNA操作 | 第49-50页 |
| ·重组子的鉴定 | 第50页 |
| ·目的基因的表达 | 第50-54页 |
| ·G418 筛选稳定过表达Smac基因的细胞株 | 第54页 |
| ·确定G418 筛选浓度 | 第54页 |
| ·稳定过表达Smac基因细胞株的G418 筛选 | 第54页 |
| ·统计学方法 | 第54-55页 |
| 第3章 结果 | 第55-90页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1~+-FL hSmac的构建 | 第55-59页 |
| ·人全长型Smac基因的克隆及鉴定 | 第55-57页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1~+-FL hSmac的构建及鉴定 | 第57-59页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1~+-FL hSmac在人肝癌细胞株SMMC-7721 中的表达 | 第59-64页 |
| ·细胞转染条件的优化及转染效率的测定 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1~+-FL hSmac在SMMC-7721 细胞中的表达.. | 第60-64页 |
| ·Smac mRNA水平表达情况 | 第60-61页 |
| ·Smac蛋白水平表达 | 第61-64页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞的影响 | 第64-90页 |
| ·顺铂剂量的选择 | 第64-65页 |
| ·氯化镉剂量的选择 | 第65页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞增殖的影响 | 第65-67页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡的影响 | 第67-72页 |
| ·AO/EB法检测细胞凋亡 | 第67-69页 |
| ·FCM检测细胞凋亡 | 第69-72页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡调控相关因子表达的影响 | 第72-74页 |
| ·稳定Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡相关因子的影响 | 第74-90页 |
| ·稳定Smac基因过表达的人肝癌细胞株的建立 | 第74-75页 |
| ·SMMC-7721/Smac细胞的生长特性 | 第75-76页 |
| ·稳定Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡相关因子的影响 | 第76-90页 |
| 第4章 讨论 | 第90-101页 |
| ·pcDNA3.1~+-FL hSmac重组质粒的构建及表达 | 第91-93页 |
| ·人全长型Smac基因的克隆 | 第91页 |
| ·pcDNA3.1~+-FL hSmac重组质粒的构建 | 第91-92页 |
| ·pcDNA3.1~+-FL hSmac重组质粒在SMMC-7721 中的表达 | 第92-93页 |
| ·稳定高效过表达Smac的人肝癌细胞株的建立及其生长特性 | 第93-95页 |
| ·Smac基因过表达对肝癌细胞的影响 | 第95-96页 |
| ·瞬时Smac基因过表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第95页 |
| ·瞬时Smac基因过表达对肝癌细胞凋亡调控相关因子的影响 | 第95-96页 |
| ·Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞的影响 | 第96-101页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞增殖的抑制作用 | 第97-98页 |
| ·瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡的影响 | 第98-99页 |
| ·瞬时/稳定Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对肝癌细胞凋亡调控相关因子表达的影响 | 第99-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-116页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文及其他成果 | 第116-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 中文摘要 | 第120-124页 |
| ABSTRACT | 第124-129页 |
