| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文缩略语 | 第12-13页 |
| 实验主要仪器 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| 第一节 生长抑素基因疫苗研究进展 | 第14-20页 |
| 1 生长抑素(SS)及其促生长作用 | 第14-17页 |
| ·生长抑素(SS)的分子结构及分布 | 第14-15页 |
| ·生长抑素(SS)作用机制及生理作用 | 第15-16页 |
| ·生长抑素(SS)作用机制 | 第15页 |
| ·生长抑素(SS)生理作用 | 第15-16页 |
| ·生长抑素(SS)的促生长作用 | 第16-17页 |
| ·主动免疫生长抑素(SS)促进动物生长 | 第16-17页 |
| ·被动免疫生长抑素(SS)促进动物生长 | 第17页 |
| 2 生长抑素与机体免疫 | 第17-20页 |
| ·SS多肽阳性细胞在淋巴器官中的分布 | 第18页 |
| ·SS对淋巴细胞分化的作用 | 第18页 |
| ·抑制淋巴细胞的增殖 | 第18-19页 |
| ·抑制细胞因子的产生 | 第19页 |
| ·生长抑素对肿瘤的作用 | 第19-20页 |
| 第二节 减毒沙门氏菌作为口服DNA疫苗载体的研究进展 | 第20-25页 |
| 1 减毒沙门氏菌进入机体免疫系统的可能机制 | 第20-22页 |
| ·减毒沙门氏菌通过粘膜上皮M细胞进入机体 | 第20-21页 |
| ·减毒沙门氏菌被树突状细胞直接从肠腔摄取进入机体 | 第21-22页 |
| 2 携带DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制 | 第22-23页 |
| 3 携带DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的应用及前景 | 第23-25页 |
| ·减毒沙门氏菌用于细菌性DNA疫苗的载体 | 第23-24页 |
| ·减毒沙门氏菌用于病毒性DNA疫苗的载体 | 第24页 |
| ·减毒沙门氏菌用于寄生虫性DNA疫苗的载体 | 第24页 |
| ·减毒沙门氏菌用作肿瘤DNA疫苗的载体 | 第24-25页 |
| 第三节 质粒-平衡致死系统的研究进展 | 第25-26页 |
| 1 染色体-质粒平衡致死系统的概念 | 第25页 |
| 2 以ASD基因为标志的平衡致死系统 | 第25-26页 |
| 3 染色体-质粒平衡致死系统在基因疫苗中的的应用 | 第26页 |
| 第四节 绿色荧光蛋白及其在细胞生物学中研究进展 | 第26-32页 |
| 1 GFP的理化性质与发光机制 | 第27-28页 |
| ·GFP的分子结构 | 第27页 |
| ·GFP的发光机制 | 第27-28页 |
| 2 绿色荧光蛋白标记的优点 | 第28-30页 |
| ·不需加任何底物,荧光性质稳定 | 第28页 |
| ·相对分子质量小,对细胞无毒性 | 第28页 |
| ·作为荧光靶使用方便,可直接用与活体测定 | 第28-29页 |
| ·检测方便 | 第29页 |
| ·无种属特异性 | 第29页 |
| ·灵敏度和分辨率高 | 第29页 |
| ·易于构建载体 | 第29页 |
| ·可进行活细胞定时定位观察 | 第29页 |
| ·易于得到突变体 | 第29-30页 |
| ·不受假阳性干扰 | 第30页 |
| 3 GFP的应用 | 第30-32页 |
| ·在转基因动物研究中的应用 | 第30页 |
| ·GFP在细胞生物学上的应用 | 第30页 |
| ·在融合蛋白中的应用 | 第30-31页 |
| ·在临床检验中的应用 | 第31页 |
| ·GFP在筛选方面的应用 | 第31-32页 |
| 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 第二章 实验研究 | 第33-58页 |
| 第一部分 无抗性生长抑素DNA疫苗的体外表达 | 第33-40页 |
| 前言 | 第33页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·质粒和细胞 | 第33页 |
| ·主要试剂及内切酶 | 第33-34页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第34-35页 |
| ·质粒小量提取所用溶液 | 第34-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| ·无抗性生长抑素质粒PGS/2SS-M4GFP-ASD的提取与鉴定 | 第35-36页 |
| ·真核细胞的培养 | 第36-37页 |
| ·质粒的转染 | 第37页 |
| ·显微镜观察绿色荧光蛋白的表达 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-39页 |
| ·PGS/2SS-M4GFP-AsD质粒酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·PGS/2SS-M4GFP-ASD质粒转染后显微观察 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第二部分 无抗性生长抑素DNA疫苗C500(PGS/2SS-M4GFP-ASD)在小鼠体内的表达与分布 | 第40-53页 |
| 前言 | 第40页 |
| 1 材料 | 第40-42页 |
| ·质粒和菌株 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·主要试剂及内切酶 | 第40-41页 |
| ·主要试剂及其配置 | 第41-42页 |
| ·免疫组化主要溶液及其配制 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·生长抑素DNA疫苗C500(PGS/2SS-M4GFP-ASD)的制备及鉴定 | 第42-43页 |
| ·C500感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·电转化 | 第42页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第42-43页 |
| ·C500(PGS/2SS-M4GFP-ASD)重组菌制备 | 第43页 |
| ·实验动物的免疫 | 第43页 |
| ·饲养管理 | 第43页 |
| ·疫苗的分组与免疫 | 第43页 |
| ·器官活体成像 | 第43-44页 |
| ·器官成像操作步骤 | 第44页 |
| ·冰冻切片制作方法 | 第44-45页 |
| ·免疫组化 | 第45-46页 |
| ·免疫组化操作步骤 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·活体成像法观察目的基因在器官中的表达 | 第46-48页 |
| ·冰冻组织切片法观察目的基因在组织中的表达 | 第48-49页 |
| ·免疫组化检测目的基因在组织中的表达 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 1 探讨新型生物标记方法在疫苗机理研究上的可行性 | 第50-51页 |
| 2 冰冻切片与自发荧光问题的解决 | 第51页 |
| 3 SS蛋白在小鼠体内的大致分布 | 第51-53页 |
| 第三部分 无抗性生长抑素DNA疫苗对小鼠的免疫应答 | 第53-58页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| ·质粒和菌株 | 第53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂及抗体 | 第53页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第53-54页 |
| ·ELISA分析溶液 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-55页 |
| ·C500(PGS/2SS-M4GFP-ASD)重组菌的制备 | 第54页 |
| ·实验动物的免疫 | 第54-55页 |
| ·饲养管理 | 第54页 |
| ·分组与免疫 | 第54-55页 |
| ·生长抑素SS特异性抗体的检测 | 第55页 |
| ·ELISA抗体检测方法 | 第55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-56页 |
| ·SS特异性抗体IGG抗体效价 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 1 关于生长抑素DNA疫苗引发的免疫应答 | 第56-58页 |
| 全文实验小结 | 第58-59页 |
| 1 总结 | 第58页 |
| 2 特色与创新点 | 第58页 |
| 3 下一步的工作 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
