中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
第一部分 文献综述 鸡传染性支气管炎病毒793/B 的研究进展 | 第12-37页 |
1. IBV 分类 | 第13页 |
2. IBV 基因组 | 第13-14页 |
3. IBV 病毒粒子结构 | 第14-15页 |
4. IBV 主要结构蛋白及功能 | 第15-20页 |
·纤突蛋白(S 蛋白或E1) | 第15-17页 |
·包膜蛋白(基质蛋白或M 蛋白) | 第17-19页 |
·核衣壳蛋白(N 蛋白) | 第19页 |
·其它蛋白 | 第19-20页 |
5. IBV 复制 | 第20-22页 |
6. IBV 血清型 | 第22-27页 |
·国外对 IBV 的分型研究 | 第22-23页 |
·国内对 IBV 分型的研究 | 第23-24页 |
·血清抗体分析 | 第24-27页 |
7. IBV RNA 重组与基因工程苗 | 第27-29页 |
8. IBV 793/B 特性 | 第29-36页 |
·分子生物学特性 | 第29-32页 |
·793/B 血清亚群 | 第29-30页 |
·核苷酸序列 | 第30-31页 |
·氨基酸序列 | 第31-32页 |
·793/B 致病性 | 第32-33页 |
·流行病学 | 第33页 |
·诊断 | 第33-35页 |
·病毒的分离 | 第33页 |
·血清学鉴定 | 第33-34页 |
·分子生物学诊断方法 | 第34-35页 |
·防制及存在的问题 | 第35-36页 |
9. 研究的意义 | 第36-37页 |
第二部分 研究内容 | 第37-64页 |
第一章 鸡传染性支气管炎病毒变异株(793/B)M 基因的克隆与序列分析 | 第37-50页 |
1 材料与方法 | 第38-44页 |
·病毒株和菌株 | 第38页 |
·器材和试剂 | 第38页 |
·SPF 鸡胚 | 第38页 |
·引物 | 第38-39页 |
·病毒的增殖与浓缩 | 第39页 |
·病毒基因组 RNA 的提取 | 第39页 |
·RT-PCR | 第39-40页 |
·cDNA 合成 | 第39-40页 |
·PCR 扩增 | 第40页 |
·PCR 产物的克隆和序列测定 | 第40-44页 |
·PCR 产物的纯化回收 | 第40-41页 |
·PCR 产物与pMD 18-T Vector 的连接反应 | 第41页 |
·TG1 感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
·连接产物转化感受态细胞 | 第42页 |
·重组质粒的鉴定 | 第42-44页 |
·序列分析 | 第44页 |
2 结果 | 第44-48页 |
·RT-PCR 扩增结果 | 第44页 |
·重组质粒的鉴定 | 第44页 |
·测序结果及核苷酸、氨基酸序列比较 | 第44-46页 |
·同源性分析 | 第46-48页 |
3 讨论 | 第48-50页 |
第二章 IBV(793/B)M基因与2种截短M基因原核表达及鉴定 | 第50-64页 |
1 材料和方法 | 第51-57页 |
·质粒及菌种 | 第51-52页 |
·主要试剂和器材 | 第52页 |
·实验动物 | 第52页 |
·鼠抗IBV(793/B)血清的制备 | 第52页 |
·引物的设计与合成 | 第52-53页 |
·pGEX6p-M、pGEX6p-M1 和 pGEX6p-M2 原核表达质粒的构建 | 第53-55页 |
·M 基因及M1、M2 截短基因的扩增 | 第53页 |
·pGEX6p-M、pGEX6p-M1 和 pGEX6p-M2 原核表达质粒的构建 | 第53-54页 |
·重组质粒的鉴定 | 第54-55页 |
·GST-M1、GST-M2 和 GST-M 重组蛋白的诱导表达 | 第55-57页 |
·重组蛋白的诱导表达 | 第55页 |
·SDS-PAGE 样品的制备 | 第55页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第55-57页 |
·Western blot 鉴定 | 第57页 |
2 结果 | 第57-62页 |
·pGEX6p-M、pGEX6p-M1 和 pGEX6p-M2 原核表达质粒的构建及鉴定 | 第57-59页 |
·GST-M、GST-M1 和 GST-M2 重组蛋白的诱导 | 第59-61页 |
·Western blot 鉴定 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62-64页 |
结论 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-77页 |
附录 | 第77-79页 |
致谢 | 第79-80页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第80页 |