| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·关于HPPCn的概况 | 第9-11页 |
| ·HPPCn的发现 | 第9页 |
| ·HPPCn的生物学特性 | 第9-11页 |
| ·HPPCn在脑缺血中作用的研究 | 第11-15页 |
| ·脑血管疾病的概况 | 第11页 |
| ·LANP家族在神经系统中的作用 | 第11-13页 |
| ·HPPCn在脑损伤中作用的研究 | 第13-15页 |
| 第二章 重组HPPCn在BL21 和Rosetta工程菌中表达效果的对比研究 | 第15-27页 |
| ·材料与方法 | 第15-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·溶液的配置 | 第15-17页 |
| ·菌株及载体 | 第17页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌的质粒转化 | 第18页 |
| ·质粒DNA的提取及PCR鉴定 | 第18-19页 |
| ·Rosetta大肠杆菌中的诱导表达 | 第19-20页 |
| ·HPPCn 在BL21 工程菌中摇瓶培养下诱导表达 | 第20-21页 |
| ·实验结果 | 第21-25页 |
| ·感受态的制备及转化结果 | 第21页 |
| ·测定的最适宜诱导时间和最适宜浓度结果 | 第21-22页 |
| ·rhHPPCn在Rosetta和BL21 工程菌中可溶性表达结果 | 第22-23页 |
| ·Rosetta和BL21 工程菌包涵体的分离及裂解结果 | 第23-25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 重组HPPCn的生产制备 | 第27-41页 |
| ·材料与方法 | 第27-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·溶液的配置 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·发酵的方法与过程 | 第28-29页 |
| ·包涵体的洗涤和裂解 | 第29页 |
| ·目的蛋白的复性 | 第29页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第29-30页 |
| ·Q-XL阴离子交换层析 | 第30页 |
| ·Sephadex 25G凝胶柱脱盐 | 第30页 |
| ·Source15Q阴离子交换层析 | 第30-31页 |
| ·纯度检测 | 第31页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第31-33页 |
| ·结果 | 第33-39页 |
| ·重组蛋白HPPCn工程菌的发酵结果 | 第33-34页 |
| ·包涵体复性结果 | 第34-35页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第35页 |
| ·4Q-XL 阴离子交换层析 | 第35-36页 |
| ·Source 15Q 阴离子交换层析 | 第36-37页 |
| ·纯化后的rhHPPCn的纯度检测结果 | 第37-38页 |
| ·纯化蛋白的鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 HPPCn在脑缺血过程中的表达及对PC12 细胞缺氧损伤的影响 | 第41-50页 |
| ·材料与方法 | 第41-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第41-42页 |
| ·溶液的配置 | 第42页 |
| ·动物 | 第42页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第42页 |
| ·细胞 | 第42-43页 |
| ·2-VO全脑缺血模型的构建 | 第43页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第43页 |
| ·反转录PCR | 第43-45页 |
| ·MTT测定氯化钴的最佳损伤浓度 | 第45页 |
| ·MTT测定HPPCn缺氧PC12 细胞的影响 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-48页 |
| ·2-VO全脑缺血模型的构建 | 第46页 |
| ·组织总RNA的提取结果 | 第46页 |
| ·SD大鼠2-VO模型不同时间HPPCn表达 | 第46-47页 |
| ·确定氯化钴最佳损伤浓度 | 第47页 |
| ·HPPCn对缺氧PC12 细胞的影响 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 总结与展望 | 第50-51页 |
| ·总结 | 第50页 |
| ·展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
