| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 研究进展 | 第13-24页 |
| ·伪狂犬病及其病毒简介 | 第13-14页 |
| ·伪狂犬病病毒 | 第13页 |
| ·PRV的基因组和基因组成 | 第13-14页 |
| ·IE180基因及IE180蛋白功能的研究进展 | 第14-16页 |
| ·IE180基因 | 第14页 |
| ·IE180蛋白及其功能 | 第14-16页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第16-19页 |
| ·DNA疫苗的发展 | 第16-17页 |
| ·DNA疫苗的免疫机制 | 第17-19页 |
| ·运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌载体系统研究进展 | 第19-24页 |
| ·减毒沙门氏菌的侵入途径 | 第19页 |
| ·减毒沙门氏菌的胞内定位及对DNA疫苗的呈送 | 第19-20页 |
| ·携带DNA疫苗重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制 | 第20-21页 |
| ·携带DNA疫苗重组减毒沙门氏菌的应用 | 第21-24页 |
| 2 实验目的、意义 | 第24-25页 |
| 第二章 伪狂犬病病毒IE180基因的分段克隆与序列分析 | 第25-39页 |
| 1 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·毒株、细胞、菌株及试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·PRV的增殖 | 第27页 |
| ·PRV基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·PCR扩增思路及引物设计 | 第27-29页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)分别扩增IE180基因两个片段 | 第29-30页 |
| ·扩增产物电泳鉴定 | 第30页 |
| ·目的片段克隆载体构建 | 第30-32页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第32页 |
| ·两个片段分别转化菌落的鉴定 | 第32-34页 |
| ·两个片段连接获得IE180全基因 | 第34-35页 |
| ·核苷酸序列的测定及分析 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·PCR扩增目的基因电泳鉴定 | 第35-37页 |
| ·IE180基因两个片段的重组质粒酶切鉴定 | 第37页 |
| ·IE180全基因重组克隆质粒酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3.讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 PRV IE180基因原核表达和活性检测 | 第39-55页 |
| 1 材料与方法 | 第39-46页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·质粒、菌株及主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要溶液的配制 | 第39-41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·原核表达载体构建 | 第42页 |
| ·重组质粒转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET-IE180的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第43页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第43页 |
| ·IE180蛋白原核表达条件的优化 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| ·包涵体粗提与复性 | 第44-45页 |
| ·表达产物的免疫印迹 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-53页 |
| ·重组原核表达载体PET-IE180的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE分析IE180蛋白的表达 | 第47-50页 |
| ·IE180重组蛋白的表达条件的优化 | 第50-52页 |
| ·IPTG浓度对IE180重组蛋白诱导表达的影响 | 第50-51页 |
| ·不同诱导时间对IE180重组蛋白表达的影响 | 第51页 |
| ·不同温度诱导对IE180重组蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·WESTERN BLOT分析 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 真核表达载体构建及以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗免疫效力研究 | 第55-67页 |
| 1 材料与方法 | 第55-60页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要溶液的配制 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·转化及鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒pCI-IE180电转化入减毒沙门氏菌S.C500 | 第57-58页 |
| ·实验动物免疫及攻毒保护力测定 | 第58-59页 |
| ·间接ELISA测定特异性抗体 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-64页 |
| ·真核表达载体PCI-IE180酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·转化入减毒沙门氏菌S.C500的PCI-IE180质粒酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·质粒遗传稳定性试验 | 第62-63页 |
| ·PRV的半数致死量测定 | 第63页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第63-64页 |
| ·攻毒保护实验 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| ·载体的选择 | 第64-65页 |
| ·免疫接种途径的选择 | 第65页 |
| ·核酸疫苗诱导机体体液免疫反应 | 第65页 |
| ·攻毒后的保护情况 | 第65-66页 |
| ·关于质粒向减毒沙门氏菌转化 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
