| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-28页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型概述 | 第15页 |
| ·HSV的形态与结构 | 第15-16页 |
| ·HSV-2 的基因组及基因表达 | 第16-17页 |
| ·HSV-2 的基因组结构 | 第16页 |
| ·HSV-2 的基因表达 | 第16-17页 |
| ·HSV 的 LAT 基因 | 第17-19页 |
| ·LAT家族 | 第17-18页 |
| ·LAT的开放读码框 | 第18-19页 |
| ·LAT的启动子 | 第19页 |
| ·LAT基因的作用机制 | 第19-25页 |
| ·LAT在病毒潜伏感染中的作用 | 第19-23页 |
| ·LAT在病毒再激活中的作用 | 第23-25页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第25-28页 |
| ·本课题的研究意义 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因ORF2 真核表达载体的构建 | 第28-42页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·溶液和培养基 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-39页 |
| ·HSV-2 LAT 基因ORF2 序列的PCR扩增 | 第31-34页 |
| ·pEGFP-C2 真核表达质粒的扩增 | 第34-37页 |
| ·pEGFP-C2 质粒和PCR产物的双酶切 | 第37页 |
| ·酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·酶切产物的回收纯化 | 第37页 |
| ·目的基因与质粒载体的连接 | 第37-38页 |
| ·制备大肠杆菌Top10 感受态细胞及连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF2 的提取 | 第38页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF2 的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·酶切鉴定产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| ·测序鉴定pEGFP-ORF2 重组质粒上的ORF2 序列 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-41页 |
| ·HSV-2 LAT基因ORF2 序列的PCR扩增 | 第39页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF2 的测序鉴定 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因ORF2 在真核细胞SH-SY5Y/Vero中的表达及鉴定 | 第42-60页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-45页 |
| ·主要仪器和设备 | 第42-43页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·溶液 | 第44-45页 |
| ·技术路线 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-53页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第45-46页 |
| ·SH-SY5Y细胞的培养 | 第46-48页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第48-49页 |
| ·重组质粒转染SH-SY5Y/Vero细胞 | 第49-51页 |
| ·RT-PCR鉴定LAT基因ORF2 的转录 | 第51-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-59页 |
| ·SH-SY5Y细胞的培养 | 第53-54页 |
| ·质粒在SH-SY5Y细胞的表达 | 第54-55页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第55页 |
| ·质粒在Vero细胞中的表达 | 第55页 |
| ·质粒在Vero细胞中的稳定筛选 | 第55-56页 |
| ·瞬时转染效率的比较 | 第56-58页 |
| ·LAT基因ORF2 转录的RT-PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第四章 单纯疱疹病毒Ⅱ型LAT基因ORF2 对Vero细胞的抗凋亡作用 | 第60-72页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60-61页 |
| ·质粒和细胞 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·溶液 | 第62页 |
| ·技术路线 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第62-63页 |
| ·质粒转染Vero细胞 | 第63页 |
| ·MTT细胞增殖实验 | 第63页 |
| ·5-FU诱导细胞凋亡 | 第63页 |
| ·Giemsa染色检测 | 第63页 |
| ·DNA ladder 片段分析 | 第63页 |
| ·Caspase 3 凋亡蛋白检测 | 第63-64页 |
| ·统计学分析 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-70页 |
| ·质粒pEGFP-ORF2 对细胞形态的影响 | 第64-65页 |
| ·质粒pEGFP-ORF2 对细胞存活率的影响 | 第65-66页 |
| ·5-FU诱导细胞凋亡浓度，时间的确定 | 第66页 |
| ·凋亡诱导后荧光显微镜形态分析 | 第66-67页 |
| ·Giemsa 染色 | 第67-68页 |
| ·细胞存活率MTT法分析结果 | 第68页 |
| ·DNA梯状凋亡条带 | 第68-69页 |
| ·荧光分光光度计检测Caspase3 活性 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 结论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
