| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·脂肪酶简介 | 第13-15页 |
| ·脂肪酶的定义 | 第13页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第13页 |
| ·脂肪酶的特点 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶分子生物学研究进展 | 第15-22页 |
| ·脂肪酶基因的克隆 | 第15-19页 |
| ·脂肪酶的结构特点 | 第19-22页 |
| ·非水相脂肪酶催化的研究进展 | 第22-27页 |
| ·非水相脂肪酶催化概述 | 第22页 |
| ·脂肪酶在非水相中的催化机制 | 第22-24页 |
| ·脂肪酶在非水相中催化的影响因素 | 第24-27页 |
| ·脂肪酶催化合成生物柴油的研究进展 | 第27-30页 |
| ·生物柴油的特性 | 第27页 |
| ·生物柴油的应用现状 | 第27-28页 |
| ·脂肪酶法制备生物柴油 | 第28-30页 |
| ·脂肪酶催化生产手性物质的研究进展 | 第30-31页 |
| ·手性拆分的概述 | 第30页 |
| ·脂肪酶在手性拆分中的应用 | 第30-31页 |
| ·脂肪酶在α-苯乙醇拆分中的应用 | 第31页 |
| ·本课题的意义和研究内容 | 第31-33页 |
| 第2章 脂肪酶基因lipK107的克隆、表达及酶学性质的研究 | 第33-58页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34-35页 |
| ·引物序列 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-56页 |
| ·产脂肪酶菌株的筛选 | 第42-43页 |
| ·产脂肪酶菌株的种属鉴定 | 第43-44页 |
| ·脂肪酶基因lipK107的克隆 | 第44-46页 |
| ·脂肪酶LipK107在大肠杆菌中的表达与优化 | 第46-50页 |
| ·脂肪酶LipK107的纯化 | 第50-51页 |
| ·脂肪酶LipK107的酶学性质研究 | 第51-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第3章 脂肪酶LipK107催化生物柴油合成的研究 | 第58-72页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·主要原料及试剂药品 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·原料油脂的理化性质研究 | 第59-60页 |
| ·全细胞催化剂的制备 | 第60页 |
| ·生物柴油的合成 | 第60-61页 |
| ·脂肪酸酷的气相色谱分析 | 第61页 |
| ·反应条件对全细胞催化剂合成生物柴油的影响 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-71页 |
| ·脂肪酸酯检测方法的确立 | 第62页 |
| ·全细胞催化剂的选择 | 第62-63页 |
| ·温度对生物柴油合成反应的影响 | 第63-64页 |
| ·酶添加量对生物柴油合成反应的影响 | 第64-65页 |
| ·含水量对生物柴油合成反应的影响 | 第65-66页 |
| ·甲醇添加量对生物柴油合成反应的影响 | 第66-68页 |
| ·有机溶剂对生物柴油合成反应的影响 | 第68页 |
| ·底物对生物柴油合成反应的影响 | 第68-70页 |
| ·全细胞催化剂的稳定性 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第4章 脂肪酶LipK107不对称拆分手性醇的研究 | 第72-88页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·主要原料及试剂药品 | 第72-73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·催化剂的制备 | 第73-74页 |
| ·LipK107的酶活测定 | 第74页 |
| ·手性拆分反应 | 第74页 |
| ·对映体的液相检测方法 | 第74页 |
| ·反应条件对LipK107催化α-苯乙醇拆分的影响 | 第74-75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-86页 |
| ·脂肪酶LipK107的纯化 | 第75页 |
| ·冻干时间对酶活的影响 | 第75-76页 |
| ·对映体的检测方法的确立 | 第76-77页 |
| ·温度对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第77-78页 |
| ·酶添加量对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第78-79页 |
| ·含水量对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第79-81页 |
| ·酰基供体对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第81-82页 |
| ·底物摩尔比对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第82-83页 |
| ·有机溶剂对α-苯乙醇拆分反应的影响 | 第83-85页 |
| ·LipK107的操作稳定性 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 第5章 脂肪酶LipK107构效关系的初探及改性的研究 | 第88-115页 |
| ·前言 | 第88页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·主要试剂 | 第88页 |
| ·菌株和质粒 | 第88-89页 |
| ·引物序列 | 第89页 |
| ·主要仪器 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-95页 |
| ·"盖子"结构的确定 | 第90-91页 |
| ·脂肪酶基因lipK107突变位点的确定 | 第91-93页 |
| ·突变方法 | 第93-94页 |
| ·突变体脂肪酶的表达及纯化 | 第94-95页 |
| ·突变体脂肪酶的酶活测定 | 第95页 |
| ·突变体脂肪酶催化α-苯乙醇的拆分反应 | 第95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-113页 |
| ·LipK107"盖子"结构的确定 | 第95-96页 |
| ·突变基因的获得 | 第96-97页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第97-98页 |
| ·突变基因的测序验证 | 第98-102页 |
| ·突变体脂肪酶的表达及纯化 | 第102-104页 |
| ·LipK107"盖子"结构突变体的性质 | 第104-110页 |
| ·LipK107催化三联体突变体的性质 | 第110-113页 |
| ·小结 | 第113-115页 |
| 第6章 结论与展望 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
