| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 文献综述 | 第11-32页 |
| 1 植物活性氧信号转导研究进展 | 第11-31页 |
| ·植物活性氧的产生和清除 | 第11-13页 |
| ·活性氧调控的生理过程 | 第13-16页 |
| ·活性氧与气孔运动 | 第13-14页 |
| ·活性氧与细胞衰老死亡过程 | 第14-15页 |
| ·活性氧与生长发育 | 第15-16页 |
| ·活性氧相关的信号转导 | 第16-21页 |
| ·氧化还原感受机制 | 第16-17页 |
| ·活性氧与Ca~(2+)信号 | 第17-18页 |
| ·活性氧与G蛋白 | 第18-19页 |
| ·活性氧与MAPK级联系统 | 第19-20页 |
| ·活性氧与NO | 第20-21页 |
| ·活性氧对基因表达的调控 | 第21-23页 |
| ·氧化胁迫应答的转录调控机制 | 第23-30页 |
| ·其他生物活性氧应答的转录调控机制 | 第23-24页 |
| ·植物活性氧特异应答的cis-element | 第24页 |
| ·参与活性氧应答转录调控的转录因子 | 第24-26页 |
| ·转录因子活性的调控方式 | 第26-30页 |
| ·展望 | 第30-31页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 研究报告 | 第32-107页 |
| 3 拟南芥H_2O_2调控基因表达的基因芯片分析 | 第32-50页 |
| ·前言 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·总RNA的纯化、定量和电泳分析 | 第34页 |
| ·第一链和第二链cDNA的合成 | 第34页 |
| ·cRNA的合成、纯化和片断化 | 第34-35页 |
| ·芯片的杂交和洗涤 | 第35页 |
| ·芯片的洗涤和扫描 | 第35页 |
| ·半定量RT-PCR检测基因表达 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-47页 |
| ·样品制备和芯片杂交实验流程的质量控制 | 第36-37页 |
| ·芯片杂交数据的处理和分析 | 第37页 |
| ·ABA和H_2O_2应答基因及其功能分类 | 第37-38页 |
| ·ABA和H_2O_2应答基因的cross-talk | 第38-44页 |
| ·ABA和H_2O_2对基因表达调控的特异性 | 第44-46页 |
| ·通过RT-PCR验证基因芯片数据 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 4 活性氧应答转录调控元件的生物信息学及遗传学分析 | 第50-62页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·植物材料 | 第50-51页 |
| ·质粒载体和菌株 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·生物信息学分析 | 第51-52页 |
| ·重组质粒构建和大量制备 | 第52-53页 |
| ·基因枪转化 | 第53页 |
| ·生物发光检测 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·活性氧特异应答基因的分析 | 第54页 |
| ·活性氧特异应答基因启动子序列的获得和MEME分析 | 第54-55页 |
| ·潜在活性氧应答顺式作用元件的分析 | 第55-57页 |
| ·基因枪介导的瞬时表达系统的建立 | 第57-58页 |
| ·不同ROE对外源活性氧处理的应答分析 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 5 MPK6-ERF6途径介导了活性氧应答的转录调控 | 第62-91页 |
| ·前言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·质粒载体和菌株 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-73页 |
| ·T-DNA插入缺失突变体的筛选和鉴定 | 第63-64页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第64页 |
| ·实时定量PCR检测基因表达 | 第64页 |
| ·pERF6-GUS转基因植物的获得 | 第64-65页 |
| ·酵母双杂交检测蛋白质相互作用 | 第65-67页 |
| ·双分子荧光互补瞬时表达验证植物细胞内蛋白互作 | 第67-68页 |
| ·体外磷酸化及磷酸化位点分析 | 第68-69页 |
| ·磷酸化位点的点突变 | 第69页 |
| ·凝胶阻滞电泳分析(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA) | 第69-70页 |
| ·基因枪转化与瞬时表达分析 | 第70-71页 |
| ·ERF6超表达转基因植物的获得 | 第71页 |
| ·转基因植物总蛋白的提取 | 第71页 |
| ·Western杂交检测目的蛋白 | 第71页 |
| ·凝胶激酶分析 | 第71-72页 |
| ·免疫共沉淀 | 第72页 |
| ·表型分析 | 第72页 |
| ·下游基因表达检测 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-87页 |
| ·ERF6的表达受活性氧和胁迫刺激诱导 | 第73-74页 |
| ·ERF6能够特异地与ROE8的结合 | 第74-75页 |
| ·ERF6激活GCC-LUC的活性 | 第75-76页 |
| ·T-DNA插入突变体erf6-1和erf6-2的筛选与鉴定 | 第76页 |
| ·ERF6可能参与了ABA调控的萌发和早期生长过程 | 第76-77页 |
| ·ERF6表达的组织特异性 | 第77-78页 |
| ·ERF6功能结构域的生物信息学分析 | 第78页 |
| ·ERF6能够与MPK3/6发生相互作用 | 第78-80页 |
| ·MPK6能够磷酸化ERF6 | 第80-81页 |
| ·ERF6磷酸化介导了核质定位 | 第81-83页 |
| ·共转化ERF6~(DD)增强GCC box转录活性 | 第83-84页 |
| ·超表达ERF6转基因植物的检测和表型分析 | 第84-85页 |
| ·ERF6转基因调控了活性氧诱导的基因表达 | 第85-86页 |
| ·H_2O_2和磷酸化调控ERF6-MPK6复合体的稳定性? | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-91页 |
| 6 结论 | 第91-92页 |
| 7 参考文献 | 第92-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
