| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 研究问题的由来 | 第15页 |
| 2 Bt基因简介 | 第15-16页 |
| 3 无标记转基因植物的培育策略 | 第16-21页 |
| 3.1 共转化法 | 第16-18页 |
| 3.1.1 双质粒双菌株法 | 第16-17页 |
| 3.1.2 双质粒单菌株法 | 第17页 |
| 3.1.3 双T-DNA区单质粒法 | 第17-18页 |
| 3.2 位点特异性重组法 | 第18-19页 |
| 3.2.1 Cre/LoxP系统 | 第18页 |
| 3.2.2 FLP/Frt系统 | 第18-19页 |
| 3.2.3 R/Rs系统 | 第19页 |
| 3.3 转座子系统 | 第19-20页 |
| 3.4 MAT载体系统 | 第20页 |
| 3.5 同源重组 | 第20-21页 |
| 3.6 PCR法 | 第21页 |
| 4 抗鳞翅目害虫转基因水稻研究进展 | 第21-25页 |
| 4.1 一个接近商业化的抗虫水稻品系:华恢1号 | 第21-22页 |
| 4.2 转新型Bt基因抗虫水稻的培育 | 第22-23页 |
| 4.3 双价Bt抗虫水稻的培育 | 第23-24页 |
| 4.4 组织特异性表达的Bt抗虫水稻 | 第24-25页 |
| 5 抗鞘翅目害虫转基因植物研究进展 | 第25-27页 |
| 5.1 对鞘翅目昆虫有效毒杀的Bt菌株及基因 | 第25-26页 |
| 5.2 抗鞘翅目害虫的转基因植物 | 第26-27页 |
| 5.2.1 转cry3A类基因的植物 | 第26-27页 |
| 5.2.2 转cry3B类基因的植物 | 第27页 |
| 5.2.3 其他类抗鞘翅目害虫的转Bt基因植物 | 第27页 |
| 6 转基因水稻安全性研究现状 | 第27-31页 |
| 6.1 食用安全性 | 第28-29页 |
| 6.2 环境安全性 | 第29-31页 |
| 6.2.1 对非靶标昆虫的影响 | 第29-30页 |
| 6.2.2 Bt水稻对根系生态系统的影响 | 第30-31页 |
| 6.3 小结 | 第31页 |
| 7 本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 无标记抗鳞翅目害虫水稻的培育 | 第33-67页 |
| 1 试验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 载体与菌株 | 第33页 |
| 1.2 Bt抗虫基因 | 第33页 |
| 1.3 水稻品种 | 第33页 |
| 1.4 供试昆虫 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-48页 |
| 2.1 技术路线 | 第34页 |
| 2.2 无标记转化载体构建 | 第34-36页 |
| 2.3 遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.4 水稻叶片DNA的少量抽提 | 第37-38页 |
| 2.5 PCR阳性检测 | 第38-39页 |
| 2.6 植物总DNA大量抽提 | 第39-40页 |
| 2.7 Southern Blotting | 第40-42页 |
| 2.8 无标记纯合后代筛选 | 第42-43页 |
| 2.9 田间杂交 | 第43页 |
| 2.10 Bt蛋白含量测定 | 第43-45页 |
| 2.10.1 ELISA反应(以Cry1C蛋白为例) | 第43-44页 |
| 2.10.2 酶标仪测定Bt蛋白浓度 | 第44-45页 |
| 2.11 室内接虫试验 | 第45-46页 |
| 2.12 田间抗虫性试验 | 第46页 |
| 2.13 农艺性状考查 | 第46页 |
| 2.14 侧翼序列分离 | 第46-47页 |
| 2.15 回交与双价聚合材料的后代纯合株系筛选 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-67页 |
| 3.1 遗传转化与DNA分子检测 | 第48-50页 |
| 3.2 纯合株系及相应的杂交种中Bt蛋白含量测定 | 第50-56页 |
| 3.2.1 Cry1C蛋白含量测定 | 第50-52页 |
| 3.2.2 Cry2A蛋白含量测定 | 第52-56页 |
| 3.3 转基因材料的室内接虫试验 | 第56-58页 |
| 3.3.1 cy1C~*转基因材料室内对一龄二化螟及三化螟的抗性 | 第56-57页 |
| 3.3.2 cry2A~*转基因材料室内对一龄二化螟及三化螟的抗性 | 第57-58页 |
| 3.4 转基因材料的田间抗虫性 | 第58-60页 |
| 3.5 转基因材料田间农艺性状考查 | 第60-62页 |
| 3.6 转基因材料中T-DNA的侧翼序列信息 | 第62-64页 |
| 3.6.1 株系1CH1-2中T-DNA的侧翼序列信息 | 第62-63页 |
| 3.6.2 株系8-30中T-DNA的侧翼序列信息 | 第63-64页 |
| 3.7 回交材料的纯合筛选 | 第64-65页 |
| 3.8 回交材料的田间农艺性状考查 | 第65-67页 |
| 第三章 抗鞘翅目害虫水稻的培育 | 第67-84页 |
| 1 试验材料 | 第67-68页 |
| 1.1 载体及菌株 | 第67页 |
| 1.2 Bt抗虫基因 | 第67页 |
| 1.3 水稻材料 | 第67页 |
| 1.4 供试昆虫 | 第67-68页 |
| 2 试验方法 | 第68-75页 |
| 2.1 技术路线 | 第68页 |
| 2.2 载体构建 | 第68-71页 |
| 2.2.1 双T-DNA载体的改造 | 第68-69页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第69-71页 |
| 2.3 遗传转化 | 第71页 |
| 2.4 水稻叶片DNA的少量抽提 | 第71页 |
| 2.5 水稻叶片RNA的抽提 | 第71页 |
| 2.6 RNA的反转录 | 第71-72页 |
| 2.7 PCR检测 | 第72-73页 |
| 2.8 T_0代植株的Southern Blotting检测 | 第73页 |
| 2.9 单拷贝纯合株系筛选 | 第73-74页 |
| 2.10 转基因纯合株系室内对稻水象甲的抗性测定 | 第74-75页 |
| 2.10.1 取食斑调查试验 | 第74页 |
| 2.10.2 死亡率调查试验 | 第74-75页 |
| 2.10.2.1 分蘖期植株接虫试验 | 第74页 |
| 2.10.2.2 幼苗期植株接虫试验 | 第74-75页 |
| 2.11 抗虫数据处理与分析 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-84页 |
| 3.1 遗传转化 | 第75页 |
| 3.2 T_0代转基因植株的Southern Blotting检测 | 第75-78页 |
| 3.3 T_0代转基因植株的表达量检测 | 第78-79页 |
| 3.3.1 T_0代转基因植株的RT-PCR检测 | 第78-79页 |
| 3.3.2 T_0代转基因植株的qRT-PCR检测 | 第79页 |
| 3.4 转基因植株的纯合株系筛选 | 第79-81页 |
| 3.5 转基因纯合株系对稻水象甲的抗性 | 第81-84页 |
| 3.5.1 取食斑总数与累计长度调查 | 第81-82页 |
| 3.5.2 转基因植株对稻水象甲成虫的抗性 | 第82-84页 |
| 第四章 讨论 | 第84-88页 |
| 1 无标记转基因材料的Bt蛋白含量 | 第84页 |
| 2 不同螟虫对Bt蛋白的敏感性差异 | 第84-85页 |
| 3 转基因材料的农艺性状 | 第85页 |
| 4 转cry1C~*与cry2A~*无标记材料的应用前景 | 第85-86页 |
| 5 无标记转基因材料的优点及pDT载体的应用 | 第86页 |
| 6 稻水象甲抗性测定方法的思考 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-101页 |
| 附录Ⅰ 载体图 | 第101-102页 |
| 附录Ⅱ Tail-PCR反应体系及程序 | 第102-104页 |
| 附录Ⅲ 组织培养试剂配制与培养基配方 | 第104-115页 |
| 2.1 相关试剂配制 | 第104-107页 |
| 2.2 籼稻遗传转化培养基配方 | 第107-111页 |
| 2.3 粳稻遗传转化培养基配方 | 第111-115页 |
| 附录Ⅳ 个人简介 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
