| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第16-26页 |
| 第一章 Luman的结构和功能 | 第16-21页 |
| 1.1 Luman的发现 | 第16页 |
| 1.2 Luman的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.3 Luman的生物学功能 | 第17-20页 |
| 1.3.1 Luman与内质网应激 | 第17-19页 |
| 1.3.2 Luman与神经系统 | 第19页 |
| 1.3.3 Luman与激素分泌 | 第19页 |
| 1.3.4 Luman与病毒感染 | 第19-20页 |
| 1.4 小结 | 第20-21页 |
| 第二章 睾酮生成及调控机制 | 第21-26页 |
| 2.1 雄性小鼠生殖系统 | 第21页 |
| 2.2 睾丸间质细胞的发育 | 第21-22页 |
| 2.3 睾酮合成 | 第22-23页 |
| 2.4 睾酮合成的调节 | 第23-25页 |
| 2.4.1 线粒体对睾酮合成的调节 | 第23页 |
| 2.4.2 细胞因子对睾酮合成的调节 | 第23-24页 |
| 2.4.3 激素与受体对睾酮合成的调节 | 第24页 |
| 2.4.4 核受体通路对睾酮合成的调节 | 第24-25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 试验研究 | 第26-96页 |
| 第三章 Luman在雄性小鼠生殖系统中的表达分布 | 第26-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第27页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 3.2.1 成年雄性昆明小鼠生殖系统各组织器官的采集 | 第27页 |
| 3.2.2 雄性小鼠生殖系统各组织器官Luman mRNA含量的检测 | 第27-30页 |
| 3.2.3 Western-blotting检测雄性小鼠生殖系统各组织Luman蛋白的表达 | 第30-31页 |
| 3.2.4 不同日龄小鼠的获取 | 第31页 |
| 3.2.5 不同日龄小鼠睾丸石蜡切片的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.6 免疫组化染色检测不同日龄小鼠睾丸中Luman蛋白的表达定位 | 第32页 |
| 3.2.7 RT-qPCR分析不同日龄小鼠睾丸中Luman mRNA的含量 | 第32-33页 |
| 3.2.8 Western-blotting检测不同日龄小鼠睾丸中Luman蛋白的表达 | 第33页 |
| 3.2.9 免疫组化检测小鼠附睾中Luman蛋白的表达定位 | 第33页 |
| 3.2.10 不同部位小鼠精子的获取 | 第33页 |
| 3.2.11 免疫荧光检测不同部位小鼠精子中Luman蛋白的表达定位 | 第33-34页 |
| 3.2.12 Western-blotting检测不同部位小鼠精子中Luman蛋白的表达 | 第34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.3.1 雄性小鼠生殖系统中Luman的表达规律 | 第34-35页 |
| 3.3.2 不同日龄小鼠睾丸中Luman的表达规律 | 第35-37页 |
| 3.3.3 小鼠附睾中Luman蛋白的表达定位 | 第37-38页 |
| 3.3.4 不同成熟度精子中Luman蛋白的表达定位的免疫荧光结果 | 第38页 |
| 3.3.5 不同成熟度精子中Luman蛋白的表达规律 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 Luman对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 | 第41-66页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第41-42页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-51页 |
| 4.2.1 MLTC-1 细胞的复苏、传代和冻存 | 第42-43页 |
| 4.2.2 hCG处理MLTC-1 细胞条件的筛选 | 第43页 |
| 4.2.3 ELISA方法检测hCG处理对MLTC-1 细胞睾酮分泌的影响 | 第43页 |
| 4.2.4 RT-qPCR检测hCG处理对MLTC-1 细胞Luman mRNA表达的影响 | 第43页 |
| 4.2.5 细胞免疫荧光检测hCG处理对MLTC-1 细胞Luman蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.6 Luman shRNA(shLuman)慢病毒介导的MLTC-1 细胞Luman干扰 | 第44-45页 |
| 4.2.7 干扰Luman对 MLTC-1 细胞睾酮分泌和类固醇激素合成酶的影响 | 第45-46页 |
| 4.2.8 小鼠原代睾丸间质细胞(PLC)的分离、培养和鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.9 .hCG处理PLC细胞条件的筛选 | 第47-48页 |
| 4.2.10 ELISA方法检测hCG处理对PLC细胞睾酮分泌的影响 | 第48页 |
| 4.2.11 RT-q PCR检测hCG处理对PLC细胞Luman mRNA含量的影响 | 第48页 |
| 4.2.12 细胞免疫荧光检测hCG处理对PLC细胞Luman蛋白表达的影响 | 第48页 |
| 4.2.13 Luman小干扰RNA(si-Luman)介导的PLC细胞Luman干扰 | 第48-49页 |
| 4.2.14 干扰Luman对 PLC细胞睾酮分泌和类固醇激素合成酶的影响 | 第49页 |
| 4.2.15 shLuman慢病毒介导的睾丸Luman干扰 | 第49-51页 |
| 4.2.16 睾丸Luman干扰效率的检测 | 第51页 |
| 4.2.17 ELISA检测shLuman对血清睾酮浓度的影响 | 第51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-64页 |
| 4.3.1 hCG处理MLTC-1 细胞条件的筛选 | 第51-52页 |
| 4.3.2 免疫荧光检测hCG处理对MLTC-1 细胞Luman表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.3 MLTC-1 细胞Luman干扰效率检验 | 第53-54页 |
| 4.3.4 Luman干扰对MLTC-1 细胞睾酮分泌的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.5 Luman干扰对MLTC-1 细胞类固醇激素合成酶的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.6 小鼠睾丸原代细胞的分离与鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.7 hCG处理PLC细胞条件的筛选 | 第57-58页 |
| 4.3.8 免疫荧光检测hCG处理对PLC细胞Luman表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.9 PLC细胞Luman干扰效率检测 | 第59-60页 |
| 4.3.10 Luman干扰对PLC细胞睾酮分泌的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.11 Luman干扰对PLC细胞类固醇激素合成酶的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.12 睾丸中Luman蛋白的干扰 | 第62-64页 |
| 4.3.13 Luman干扰对小鼠血清睾酮浓度的影响 | 第64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 Luman影响睾酮分泌的机制研究 | 第66-85页 |
| 5.1 试验材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第66页 |
| 5.1.2 试验仪器 | 第66-67页 |
| 5.2 试验方法 | 第67-75页 |
| 5.2.1 稳定表达shRNA MLTC-1 细胞的准备 | 第67页 |
| 5.2.2 hCG处理稳定表达shRNA的 MLTC-1 细胞系 | 第67页 |
| 5.2.3 RT-qPCR检测类固醇激素合成相关核受体的表达 | 第67-68页 |
| 5.2.4 重组质粒pNur-77-luc和 pSF-1-luc的扩增与鉴定 | 第68-69页 |
| 5.2.5 SF-1和Nur-77 启动子活性检测 | 第69-70页 |
| 5.2.6 (BU)2c AMP和 H89 处理稳定表达shRNA的 MLTC-1 细胞系 | 第70页 |
| 5.2.7 细胞上清液睾酮含量的检测 | 第70页 |
| 5.2.8 (BU)2c AMP和 H89 处理对MLTC-1 类固醇激素合成酶的影响 | 第70页 |
| 5.2.9 细胞内c AMP含量检测 | 第70页 |
| 5.2.10 RT-qPCR检测PKA通路相关蛋白的表达 | 第70-71页 |
| 5.2.11 重组质粒pLhcgr-luc的构建 | 第71-74页 |
| 5.2.12 pLhcgr-luc载体活性检验 | 第74页 |
| 5.2.13 Lhcgr启动子活性检测 | 第74-75页 |
| 5.3 结果与分析 | 第75-82页 |
| 5.3.1 干扰Luman对类固醇激素合成相关核受体的影响 | 第75页 |
| 5.3.2 核受体Nur-77和SF-1 启动子双荧光素酶载体鉴定结果 | 第75-76页 |
| 5.3.3 干扰Luman对 Nur-77和SF-1 启动子活性的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.4 (BU)2c AMP和 H89 处理对睾酮分泌和类固醇激素合成酶的影响 | 第77-78页 |
| 5.3.5 干扰Luman对细胞内c AMP浓度的影响 | 第78页 |
| 5.3.6 干扰Luman对 c AMP合成相关蛋白的影响 | 第78-79页 |
| 5.3.7 Lhcgr启动子双荧光素酶报告载体的构建 | 第79-81页 |
| 5.3.9 Lhcgr启动子双荧光素酶报告载体活性验证 | 第81页 |
| 5.3.10 干扰Luman对 Lhcgr启动子活性的影响 | 第81-82页 |
| 5.4 讨论 | 第82-83页 |
| 5.5 小结 | 第83-85页 |
| 第六章 Luman在 hCG介导的MLTC-1 细胞内质网应激中的作用 | 第85-95页 |
| 6.1 材料 | 第85-86页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第85页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第85-86页 |
| 6.2 试验方法 | 第86-88页 |
| 6.2.1 hCG诱导MLTC-1 细胞发生内质网应激浓度的筛选 | 第86页 |
| 6.2.2 流式细胞术检测Luman干扰对MLTC-1 细胞周期的影响 | 第86-87页 |
| 6.2.3 RT-qPCR方法检测MLTC-1 细胞周期蛋白的表达 | 第87页 |
| 6.2.4 Luman shRNA(shLuman)慢病毒介导的MLTC-1 细胞Luman干扰 | 第87页 |
| 6.2.5 ELISA检测高浓度hCG刺激对MLTC-1 细胞分泌睾酮的影响 | 第87页 |
| 6.2.6 高浓度hCG对内质网应激相关蛋白和类固醇激素合成酶表达的影响 | 第87-88页 |
| 6.2.7 Luman干扰对凋亡相关蛋白表达的影响 | 第88页 |
| 6.3 结果与分析 | 第88-92页 |
| 6.3.1 hCG诱导MLTC-1 细胞发生内质网应激的处理条件 | 第88-90页 |
| 6.3.2 Luman干扰对MLTC-1 细胞周期的影响 | 第90-91页 |
| 6.3.3 干扰Luman对 MLTC-1 细胞ERS相关蛋白的影响 | 第91-92页 |
| 6.3.4 干扰Luman对细胞凋亡相关蛋白的影响 | 第92页 |
| 6.4 讨论 | 第92-94页 |
| 6.5 小结 | 第94-95页 |
| 第七章 结论 | 第95-96页 |
| 创新点 | 第96页 |
| 进一步研究 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109-110页 |
