| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-22页 |
| 实验材料 | 第22-28页 |
| 实验方法 | 第28-54页 |
| 1. 常规分子生物学实验 | 第28-35页 |
| 2. 常规细胞生物学实验 | 第35-38页 |
| 3. 应用HIV1重组病毒模型评价化合物药效 | 第38-39页 |
| 4. 表型混合HIV-1病毒模型的建立 | 第39-46页 |
| 4.1 逆转录酶真核表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 4.2 逆转录酶的表达与纯化 | 第40-42页 |
| 4.3 逆转录酶的酶活性测定 | 第42-44页 |
| 4.4 突变pNL4-3.Luc.R~-E~-质粒的构建 | 第44-45页 |
| 4.5 表型混合HIV-1的制备 | 第45页 |
| 4.6 病毒p24含量测定 | 第45-46页 |
| 4.7 病毒浓缩 | 第46页 |
| 5. 检测RNase H活性升高对HIV-1复制的影响 | 第46-47页 |
| 6. 检测RNase H活性升高对聚合酶抑制剂药效的影响 | 第47页 |
| 7. 可控定量表达逆转录酶稳转细胞系的构建 | 第47-49页 |
| 8. 检测3TC在逆转录酶稳转细胞中的抗HIV-1_(RT-M184V)药效 | 第49页 |
| 9. NPB-524抗HIV-1作用机制研究 | 第49-54页 |
| 9.1 MTS法检测NPB524对细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| 9.2 NPB524抗VSV-G/HIV-1药效检测方法 | 第50页 |
| 9.3 NPB524抗HIV-1活病毒药效检测方法 | 第50页 |
| 9.4 Time of Addition(TOA)实验 | 第50-51页 |
| 9.5 检测NPB524对HIV-1转录和翻译的影响 | 第51页 |
| 9.6 检测NPB524对启动子转录活性的影响 | 第51-54页 |
| 第一部分 RNase H活性升高对HIV-1复制及聚合酶抑制剂药效学的影响 | 第54-84页 |
| 1. 升高HIV-1病毒颗粒的相对RNase H活性 | 第55-62页 |
| 1.1 初步选择逆转录酶突变位点 | 第55-56页 |
| 1.2 成功表达并纯化野生型和7种突变逆转录酶p66亚基 | 第56-57页 |
| 1.3 野生型和7种突变逆转录酶p66亚基酶活性测定 | 第57-59页 |
| 1.4 野生型HIV-1及7种表型混合HIV-1的包装和复制能力 | 第59-62页 |
| 2. RNase H活性升高可抑制HIV-1的复制 | 第62页 |
| 3. RNase H活性升高对聚合酶抑制剂药效的影响 | 第62-72页 |
| 3.1 RNase H活性升高对聚合酶抑制剂抗野生HIV-1药效无显著影响 | 第62-67页 |
| 3.2 RNase H活性升高对聚合酶抑制剂抗耐药HIV-1药效的影响 | 第67-72页 |
| 4. 聚合酶活性升高对3TC抗HIV-1_(RT-M184V)药效的影响 | 第72页 |
| 5. 胞浆中外源性逆转录酶无法影响HV-1逆转录过程 | 第72-78页 |
| 第一部分 讨论 | 第78-83页 |
| 第一部分 结论 | 第83-84页 |
| 第二部分 NPB524抗HIV-1作用机制研究 | 第84-93页 |
| 1. NPB524对细胞增殖无影响 | 第84-85页 |
| 2. NPB524扰HIV-1活性 | 第85页 |
| 3. NPB524抗HIV-1作用机制研究 | 第85-92页 |
| 3.1 NPB524作用环节初步确认 | 第85-86页 |
| 3.2 NPB524对HIV-1转录和翻译的影响 | 第86页 |
| 3.3 NPB524对HIV-1翻译无影响 | 第86-87页 |
| 3.4 NPB524对NF-κB和Tat诱导的LTR转录活性的影响 | 第87-89页 |
| 3.5 NPB524抑制Tat诱导的Sp1介导的LTR转录活性 | 第89-92页 |
| 第二部分 讨论及结论 | 第92-93页 |
| 总结 | 第93-95页 |
| 创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 附图 | 第103-109页 |
| 缩略词表 | 第109-113页 |
| 文献综述 | 第113-128页 |
| 参考文献 | 第123-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
