| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第16-30页 |
| 1.1 神经母细胞瘤 | 第16-21页 |
| 1.1.1 简介 | 第16页 |
| 1.1.2 病理分类 | 第16页 |
| 1.1.3 症状和体征 | 第16-17页 |
| 1.1.4 病因 | 第17页 |
| 1.1.5 分子遗传学改变 | 第17-18页 |
| 1.1.6 诊断 | 第18-19页 |
| 1.1.7 治疗 | 第19-21页 |
| 1.1.8 预后 | 第21页 |
| 1.2 脱氧胆酸 | 第21-23页 |
| 1.2.1 胆酸和脱氧胆酸 | 第21-22页 |
| 1.2.2 脱氧胆酸用途 | 第22页 |
| 1.2.3 脱氧胆酸的肿瘤应用 | 第22-23页 |
| 1.3 细胞周期 | 第23-25页 |
| 1.3.1 概念 | 第23页 |
| 1.3.2 周期检测点 | 第23-24页 |
| 1.3.3 细胞周期调控 | 第24-25页 |
| 1.4 细胞凋亡 | 第25-28页 |
| 1.4.1 概念 | 第25页 |
| 1.4.2 凋亡特征 | 第25-26页 |
| 1.4.3 凋亡主要途径 | 第26页 |
| 1.4.4 凋亡调控因子 | 第26-28页 |
| 1.5 本论文研究内容和意义 | 第28-30页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第28-29页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第29-30页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第30-36页 |
| 2.1 主要材料和试剂 | 第30-32页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验试剂配制 | 第33-36页 |
| 2.3.1 药品的配制 | 第33页 |
| 2.3.2 试剂的配制 | 第33-36页 |
| 3 实验方法 | 第36-45页 |
| 3.1 肿瘤细胞的培养 | 第36-37页 |
| 3.1.1 细胞培养基的配制 | 第36页 |
| 3.1.2 细胞复苏 | 第36页 |
| 3.1.3 细胞培养与传代 | 第36页 |
| 3.1.4 细胞冻存 | 第36-37页 |
| 3.2 实验药物处理 | 第37页 |
| 3.3 MTT法检测细胞增殖率 | 第37页 |
| 3.4 集落形成实验 | 第37-38页 |
| 3.5 乳酸脱氢酶(LDH)活性检测 | 第38页 |
| 3.6 细胞形态学观察 | 第38-39页 |
| 3.6.1 普通光学倒置显微镜下细胞形态的观察 | 第38页 |
| 3.6.2 Hoechest 33258染色观察 | 第38-39页 |
| 3.6.3 AO/EB染色观察 | 第39页 |
| 3.7 JC-1染色观察细胞跨膜电位的变化 | 第39页 |
| 3.8 PI单染流式细胞术检测细胞周期变化 | 第39-40页 |
| 3.9 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第40页 |
| 3.10 DCFH-DA荧光探针流式细胞术检测细胞内活性氧ROS的水平 | 第40-41页 |
| 3.11 NAC抑制细胞内ROS实验 | 第41页 |
| 3.12 Western blot | 第41-42页 |
| 3.12.1 细胞总蛋白提取与蛋白浓度的测定 | 第41页 |
| 3.12.2 蛋白质的SDS-PAGE电泳及Western blotting分析 | 第41-42页 |
| 3.13 RT-PCR检测基因表达 | 第42-44页 |
| 3.13.1 总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 3.13.2 合成cDNA | 第43页 |
| 3.13.3 荧光PCR | 第43-44页 |
| 3.14 MK2206和LYP294002与DCA联合作用下对细胞增殖影响 | 第44页 |
| 3.15 细胞迁移能力分析划痕实验 | 第44-45页 |
| 4 实验结果 | 第45-69页 |
| 4.1 DCA对SHSY-5Y细胞生长的抑制作用 | 第45页 |
| 4.2 DCA对SHSY-5Y细胞集落形成能力的影响 | 第45-46页 |
| 4.3 DCA对SHSY-5Y细胞LDH释放的影响 | 第46-47页 |
| 4.4 DCA作用对SHSY-5Y细胞形态的影响 | 第47-50页 |
| 4.4.1 倒置相差显微镜下观察DCA作用后细胞形态学变化 | 第47-48页 |
| 4.4.2 AO/EB染色观察细胞凋亡变化情况 | 第48-49页 |
| 4.4.3 Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化 | 第49-50页 |
| 4.5 PI单染流式细胞术检测细胞周期变化 | 第50-51页 |
| 4.6 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第51-53页 |
| 4.7 DCA作用抑制SHSY-5Y细胞增殖的机制 | 第53-55页 |
| 4.7.1. DCA作用对SHSY-5Y细胞中PCNA蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| 4.7.2 DCA作用对SHSY-5Y细胞中CDK1和cyclin B1蛋白表达的影响 | 第54页 |
| 4.7.3. DCA作用对SHSY-5Y细胞中p21、p53基因表达的影响 | 第54-55页 |
| 4.8 DCA作用引起SHSY-5Y细胞凋亡的机制 | 第55-66页 |
| 4.8.1 DCFH-DA流式细胞术检测细胞内ROS的变化 | 第55-57页 |
| 4.8.2 JC-1荧光探针装载检测细胞线粒体膜电位变化 | 第57-58页 |
| 4.8.3 DCA对SHSY-5Y细胞中Bax/Bcl-2蛋白表达的影响 | 第58页 |
| 4.8.4 DCA对细胞色素C释放和Apaf1表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.8.5 DCA作用对SHSY-5Y细胞中Caspase家族蛋白表达的影响 | 第59-61页 |
| 4.8.6 ROS被抑制后,细胞相关状态的变化 | 第61-64页 |
| 4.8.7 DCA作用对SHSY-5Y细胞中Akt磷酸化蛋白表达的影响 | 第64-65页 |
| 4.8.8 AKT抑制剂MK2206辅助作用DCA对SHSY-5Y细胞增殖影响 | 第65-66页 |
| 4.8.9 PI3K抑制剂LYP294002辅助作用DCA对SHSY-5Y细胞增殖影响 | 第66页 |
| 4.9 DCA作用对SHSY-5Y细胞迁移侵袭能力的影响 | 第66-69页 |
| 4.9.1 DCA作用对SHSY-5Y细胞迁移能力影响 | 第67-68页 |
| 4.9.2 DCA作用对SHSY-5Y细胞内MMP-9蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 5 讨论 | 第69-74页 |
| 5.1 DCA对SHSY-5Y细胞生长的抑制作用 | 第69页 |
| 5.2 DCA引起SHSY-5Y细胞凋亡作用 | 第69-70页 |
| 5.3 DCA作用引起SHSY-5Y细胞周期阻滞的机制 | 第70-71页 |
| 5.4 DCA作用引起SHSY-5Y细胞凋亡的机制 | 第71-74页 |
| 6 结论 | 第74-75页 |
| 7 展望 | 第75-76页 |
| 8 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
